homogenizacion y centrifugaron

Universidad Nacional Autónoma De México.
Facultad de Estudios Superiores
Cuautitlán.
Carrera: Bioquímica Diagnostica.
Sección de bioquímica y farmacología humana.
Departamento de ciencias biológicas


Practica #2: Homogenización y Centrifugación.








Introducción:
Existen dos tipos principales de células, las procariotas organismos unicelulares y las eucariontes(animales y vegétales) que son multicelulares. Aunque sean dos células diferentes las dos tiene orgánulos que cumplen una función específica. Los principales son: La membrana, el citoplasma y el núcleo.
Para su estudio existen 2 tipos de métodos científicos utilizados para ello.
-Homogenización: La homogenización ocasiona alteración de las partículas en una suspensión. A menudo es usada enbebidas para reducir la sedimentación, para aumentar la viscosidad o para crear una mejor textura.
Disgregación o rotura (homogeneización) de las células y liberación de los orgánulos. (Mortero, Potter y virtis). El tejido se homogeneiza, normalmente en una solución tampón isotónica usando una variedad de mecanismos (moler, picar, triturar, cambios de presiónLa solución se homogeneiza en unasolución isotónica para detener el daño osmótico, con una solución tampón para regular el pH, y a una temperatura muy baja para evitar daños enzimáticos. Los orgánulos se mantienen en frío, en un medio isotónico y tamponado.
El resultado ahora es una pasta fina de líquido, el homogéneo de células, que consta de células intactas y componentes celulares. Con un cuidadoso trabajo se mantienen intactos losorgánulos celulares, siendo funcionales en gran medida.

-La centrifugación: Debido a las diferencias en tamaño y densidad, cada componente celular está sujeto a una fuerza centrífuga. La fuerza generada por la centrífuga se expresa como fuerza centrífuga relativa (RCF) en unidades de g. La RCF es una función de velocidad de centrifugación en revoluciones por minutos (rpm) y la distancia departículas desde el eje de rotación. Conociendo esta distancia (x) y el (rpm), se puede determinar el RCF de la ecuación: RCF =1.19 x 10-5 (rpm)2x, donde x se toma como la distancia (en cm) desde el eje de rotación hastael margen de afuera del tubo de centrífuga es un procedimiento físico que permite la separación de partículas, bien sean células, orgánulos, moléculas, etc. en base a la diferentevelocidad a la que sedimentan en un medio acuoso bajo la acción de un campo centrífugo. Este campo se aplica en unos aparatos denominados: centrífugas por medio de la rotación de una de las piezas, llamada rotor, a gran velocidad dentro de una cámara acorazada en la que puede estar la temperatura controlada (para evitar la degradación de muestras termosensibles) y en ocasiones bajo vacío (para evitar elcalentamiento del rotor por el rozamiento con el aire).
Se necesitan considerar ciertos puntos para la centrifugación de la muestra.
-volumen: el volumen y tipo de los tubos para el uso de una centrifuga.
-Muestra a centrifugar: No usando un acido o base fuerte dentro de la centrifuga.
-Aceleración: No todos los materiales a centrifugar no soportan altas aceleraciones para aceleracionesinferiores a 400g no hay problema, pero para valores superiores hay que indagar qué tipo de material se puede usar.
-Temperatura: Algunos materiales solo resisten aceleraciones a baja temperatura. Hay que tener en cuenta ambos factores al elegir el tipo de tubo a usar.
Existen 3 tipos.
1. Centrífugas de baja velocidad, de sobremesa o clínicas.
2. Centrífugas de alta velocidad.
3.Ultracentrífugas.
Todas estas muetras deben de estar en una solución amortiguadora, salina  ó azúcar isotónica. Para mantener  la integridad de los organeros y enzimas durante el procedimiento todas estas muestras deben de estar frías.
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