Hongos Entomopatogenos Metodo RAPDS

Universida de San Carlos de Guatemala
Facultad de Agronomia





















Hongos Fitopatogenos con la Tecnica RAPDs















Cristina Maria Moran Garcia
Carne: 200722709

Guatemala 26 de abril de 2013

Marcadores moleculares RAPD
Random Amplified Polymorphic DNAs
(polimorfismo de ADN amplificado al azar)

Caracteristicas del analisisRAPDs
Consiste en la amplificación mediante PCR de ADN anónimo, utilizando para ello un único iniciador de secuencia arbitraria. Los oligonucleótidos iniciadores (primers) se diseñan sin tener en cuenta información de la secuencia genómica de la especie a analizar.

Normalmente se usa un sólo iniciador, de 10 nucleótidos de longitud (más corto que el de una PCR común) y con un alto contenido enG+C.-Ejemplo: OP-A01

RAPDs
Amplificación de ADN anónimo con iniciadores de secuencia arbitraria


Los RAPDs son marcadores genéticos dominantes

Origen del polimorfismo de los RAPDs

Puede deberse a: inserciones (2), deleciones(3), mutaciones de punto que impiden la unión del iniciador (4), o que crean un nuevo sitio de unión del iniciador (5).

Ejemplo: RAPDs en sorgoProblemas en la Interpretación de bandas de RAPDs
Problemas de subjetividad del operador:
¿Qué bandas se incluyen en el análisis y cuáles no?
•Problemas de la comigración:
-Una banda no contiene necesariamente un único fragmento de ADN.
-Una banda del mismo tamaño en dos individuos no representa necesariamente el mismo fragmento de ADN.

Ventajas de los RAPDs
No requieren conocimientoprevio del genoma (anónimos).
•El ensayo es rápido, simple y económico.
•Se dispone de un número ilimitado de marcadores.
•El polimorfismo es elevado.
•Proveen una amplia cobertura del genoma.
•Son más polimórficos que los RFLPs.

Desventajas de los RAPDs
La herencia es dominante (menor información genotípica).
•Poseen problemas de reproducibilidad.
•La interpretación de bandas presentadificultades.
•Son difíciles de transferir a otros laboratorios.
•A medida que la distancia filogenética aumenta, también aumenta la probabilidad de que dos fragmentos de ADN diferentes comigren y se cometan errores de cómputo (no son confiables para comparación entre especies distintas).
•Sólo se puede computar presencia compartida de bandas y no la ausencia.

Identificacion de HongosFitopatogenos, mediante el uso de RAPDs

Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae y Paecilomyces fumosoroseus son hongos con la capacidad de causar enfermedad en larvas de Diatraea saccharalis
Como tal, tienen un gran potencial como controladores biológicos siempre que se logre masificar aislamientos específicos, virulentos y eficientes. Esto se puede conseguir a través de la transformacióngenética, que ya esto es posible para algunas características de interés de los mismos. En esta investigación a través de un análisis de perfiles de amplificación de segmentos de ADN de los tres hongos entomopatógenos aislados del insecto y utilizando la técnica de RAPD se consiguieron los fragmentos OPD-13

Las enfermedades de hongos en los insectos son comunes y frecuentemente diezman poblacionescompletas. Los hongos entomopatógenos están asociados con insectos que habitan diversos ambientes, incluyendo ecosistemas agrícolas, forestales y pastoriles, así como en aguas dulces, suelos y aire El control microbiano es parte del control biológico y actualmente ambos son elementos importantes en el nuevo sistema de controlar las plagas, el cuales denominado Manejo Integrado de Plagas (MIP) óProducción Integrada (PI) y se ha convertido en un componente fundamental de las iniciativas de la agricultura sostenible(4). El comportamiento o potencialidad para “matar plagas” por parte de los microorganismos entomopatógenos, llamado comúnmente virulencia, está determinado por las características genéticas del individuo

Los hongos entomopatógenos presentan variaciones genéticas debido a...