Horario De Actividades
Páginas: 8 (1760 palabras)
Publicado: 8 de febrero de 2013
PRÁCTICAS BIOQUÍMICA Y MICROBIOLOGÍA INDUSTRIALES (Licenciatura de Bioquímica) Dr. Pedro F. Mateos González Dr. Pedro M. Coll Fresno
INTRODUCCION
De todos los productos de origen biológico producidos a escala industrial, los antibióticos son probablemente los más importantes tanto desde el punto de vista económico como sanitario. Los antibióticos son compuestos orgánicos de bajo pesomolecular producidas por ciertos microorganismos para eliminar o inhibir el crecimiento de otros microorganismos. Desde el punto de vista metabólico, son productos del metabolismo secundario y por lo tanto, no necesarios para el crecimiento normal de los microorganismos productores. El hábitat natural de la mayoría de los microorganismos productores de antibióticos es el suelo. Entre los productores másimportantes figuran hongos filamentosos (Aspergillus, Penicillium y Cephalosporium), bacterias Gram (+) formadoras de endosporas (Bacillus) y bacterias filamentosas (Streptomyces). La práctica que vamos a realizar consistirá en el aislamiento microorganismos productores de antibióticos a partir de una fuente natural: el suelo. Intentaremos identificarlos, ensayaremos la actividad del antibióticoque produzcan respecto a otro antibiótico de referencia ya conocido y finalmente realizaremos el espectro de actividad del nuevo antibiótico.
1ª parte: AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE ANTIBIOTICOS
El objetivo inicial es aislar microorganismos a partir de una muestra de suelo mediante siembra en medio rico no selectivo (Agar nutritivo). Posteriormente se seleccionaránmicroorganismos productores de antibióticos por su capacidad de formar halos de inhibición del crecimiento de un micoorganismo sensible
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
DIA 1 (viernes) -Preparar una suspensión de una muestra de origen natural (suelo) en agua estéril: 10 g suelo + 90 ml agua estéril -Agitar durante 1 hora para resuspender bien los microorganismos adheridos a las partículas del suelo.-Grupo A: Preparar diluciones seriadas de la suspensión anterior de 10-1, 10-2, 10-3, 10-4 y 10-5. (0,5 ml de suspensión + 4,5 ml de agua estéril). -Grupo B- Calentar la suspensión de suelo 10 min. a 80° C y posteriormente realizar diluciones seriadas1:4 (1/4, 1/16, 1/64, 1/256, 1/1.024) (1,5 ml de suspensión+4,5 ml de agua estéril). -Sembrar 0,2 ml de cada dilución en una placa de Agar Nutritivocon un asa de Digralski. -Incubar a 25° C durante 3 días, para favorecer el crecimiento de microorganismos mesófilos. DIA2 (lunes) -Observar los microorganismos que han crecido en las placas de Agar Nutritivo. -Elegir la placa en la que haya entre 30-300 colonias. Hacer un recuento de las colonias y expresar el resultado en ufc/g suelo.
SELECCION DE MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE ANTIBIOTICOSDIA2 (lunes) -Sembrar en placas test algunos de los microorganismos aislados con el fin de poder seleccionar los productores de antibiótico. Utilizaremos como microorganismos sensibles Bacillus subtilis (Gram+) o Pseudomonas (Gram-). Preparación de placas test: -Añadir a un tubo con 20 ml de Agar Nutritivo fundido y mantenido a 50°C, 1 ml de una suspensión del microorganismo sensible. -Tapar eltubo con parafilm. Homogenizar por inversión una vez. -Verter sobre una placa Petri vacía y dejar solidificar. Siembra de las placas test -Identificar en las placas de Agar Nutritivo con colonias bien aisladas varios microorganismos morfológicamente diferentes. -Sembrar estos microorganismo en estría sobre la superficie de las placas test utilizando palillos estériles (8-10 estrías por placa).-Incubar las placas a 25° C durante 24 horas para permitir el crecimiento de los microorganismos aislados del suelo y la producción de antibiótico DIA3(martes) -Observar si se han producido halos de inhibición del crecimiento del microorganismo sensible alrededor de algunas de las estrías -Aislar el microorganismo productor.
2ª parte: IDENTIFICACION DEL MICROORGANISMO PRODUCTOR DE ANTIBIOTICO...
INTRODUCCION
De todos los productos de origen biológico producidos a escala industrial, los antibióticos son probablemente los más importantes tanto desde el punto de vista económico como sanitario. Los antibióticos son compuestos orgánicos de bajo pesomolecular producidas por ciertos microorganismos para eliminar o inhibir el crecimiento de otros microorganismos. Desde el punto de vista metabólico, son productos del metabolismo secundario y por lo tanto, no necesarios para el crecimiento normal de los microorganismos productores. El hábitat natural de la mayoría de los microorganismos productores de antibióticos es el suelo. Entre los productores másimportantes figuran hongos filamentosos (Aspergillus, Penicillium y Cephalosporium), bacterias Gram (+) formadoras de endosporas (Bacillus) y bacterias filamentosas (Streptomyces). La práctica que vamos a realizar consistirá en el aislamiento microorganismos productores de antibióticos a partir de una fuente natural: el suelo. Intentaremos identificarlos, ensayaremos la actividad del antibióticoque produzcan respecto a otro antibiótico de referencia ya conocido y finalmente realizaremos el espectro de actividad del nuevo antibiótico.
1ª parte: AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE ANTIBIOTICOS
El objetivo inicial es aislar microorganismos a partir de una muestra de suelo mediante siembra en medio rico no selectivo (Agar nutritivo). Posteriormente se seleccionaránmicroorganismos productores de antibióticos por su capacidad de formar halos de inhibición del crecimiento de un micoorganismo sensible
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
DIA 1 (viernes) -Preparar una suspensión de una muestra de origen natural (suelo) en agua estéril: 10 g suelo + 90 ml agua estéril -Agitar durante 1 hora para resuspender bien los microorganismos adheridos a las partículas del suelo.-Grupo A: Preparar diluciones seriadas de la suspensión anterior de 10-1, 10-2, 10-3, 10-4 y 10-5. (0,5 ml de suspensión + 4,5 ml de agua estéril). -Grupo B- Calentar la suspensión de suelo 10 min. a 80° C y posteriormente realizar diluciones seriadas1:4 (1/4, 1/16, 1/64, 1/256, 1/1.024) (1,5 ml de suspensión+4,5 ml de agua estéril). -Sembrar 0,2 ml de cada dilución en una placa de Agar Nutritivocon un asa de Digralski. -Incubar a 25° C durante 3 días, para favorecer el crecimiento de microorganismos mesófilos. DIA2 (lunes) -Observar los microorganismos que han crecido en las placas de Agar Nutritivo. -Elegir la placa en la que haya entre 30-300 colonias. Hacer un recuento de las colonias y expresar el resultado en ufc/g suelo.
SELECCION DE MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE ANTIBIOTICOSDIA2 (lunes) -Sembrar en placas test algunos de los microorganismos aislados con el fin de poder seleccionar los productores de antibiótico. Utilizaremos como microorganismos sensibles Bacillus subtilis (Gram+) o Pseudomonas (Gram-). Preparación de placas test: -Añadir a un tubo con 20 ml de Agar Nutritivo fundido y mantenido a 50°C, 1 ml de una suspensión del microorganismo sensible. -Tapar eltubo con parafilm. Homogenizar por inversión una vez. -Verter sobre una placa Petri vacía y dejar solidificar. Siembra de las placas test -Identificar en las placas de Agar Nutritivo con colonias bien aisladas varios microorganismos morfológicamente diferentes. -Sembrar estos microorganismo en estría sobre la superficie de las placas test utilizando palillos estériles (8-10 estrías por placa).-Incubar las placas a 25° C durante 24 horas para permitir el crecimiento de los microorganismos aislados del suelo y la producción de antibiótico DIA3(martes) -Observar si se han producido halos de inhibición del crecimiento del microorganismo sensible alrededor de algunas de las estrías -Aislar el microorganismo productor.
2ª parte: IDENTIFICACION DEL MICROORGANISMO PRODUCTOR DE ANTIBIOTICO...
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