HPLC BUENAS TAREAS


INTRODUCCIÓN
La cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) es un proceso analítico que utiliza un instrumento especialmente diseñado para separar, cuantificar y analizar los componentes de una mezcla química. Un equipo de HPLC consiste esencialmente de un sistema de inyección, un reservorio para el disolvente, una bomba peristáltica, una columna, un detector y un aparato de registro.El papel esencial de las bombas es impulsar a la fase móvil con presión y flujo constante, el proceso de inyección de la muestra en la actualidad es automática, las columnas que se utilizan normalmente son de acero inoxidable y los detectores su papel fundamentalmente es de indicar el momento de aparición de los diferentes componentes que constituyen la muestra, calificarlo cuantitativamente comocualitativamente. (Wiberg & Wiberg, 2001)
Los detectores más comunes de los que se dispone son 2: El detector ultravioleta-visible de longitud de onda variable y el detector LSD (evaporative light-scattering detector) pero pueden ser muchos más detectores como detectores de refracción, detectores de espectrómetro de masas y RMN. Un aparato de HPLC moderno se equipa con uno o más recipientes devidrio o acero inoxidable, cada uno de los cuales contiene unos 500 mL de un disolvente. Para purificar una mezcla de compuestos, un pequeño volumen de muestra es inyectado en el aparato donde es acarreado por el disolvente o fase móvil hacia la columna y eluído hasta salir de la columna por la fase móvil seleccionada más adecuada basado en las características de la muestra.
 Las técnicascromatografías en columna son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase móvil como se mencionó con anterioridad la cual consiste en un fluido (gas, líquido, o fluido supercrítico) que en el caso de cromatografía de HPLC es un fluido que es arrastrado a la muestra con un flujo constante de presión proporcionado por una bomba que suele ser una bomba reciproca constituida por un pistón que mueve el fluido apresiones mayores de 6000 psi. (Wiberg & Wiberg, 2001)
El modo de uso más frecuente de la cromatografía líquida de fase reversa (RP) HPLC se aplica comúnmente en la industria farmacéutica, análisis bioquímico y medioambiental. La fase estacionaria más popular en RP HPLC es sílice de octadecilo (SAO o C 18). Además de columnas de relleno a base de sílice, también poliméricos (envasados ​​omonolíticos) y columnas monolíticas de sílice se utilizan en RP HPLC.  (Qiu et al., 2011)
El mecanismo de separación en fase reversa será, principalmente, el reparto, por lo que los solutos se repartirán entre una fase estacionaria líquida y apolar y una fase móvil también líquida, más polar que la anterior, si bien no se descarta una cierta adsorción. En cualquier caso, la separación se produce porquelas moléculas de soluto se distribuyen entre las dos fases en función de su solubilidad relativa en cada una de ellas. En su desplazamiento a lo largo del sistema cromatográfico, los solutos se mueven a diferentes velocidades, dependiendo de su afinidad por la fase estacionaria respecto a la fase móvil. Cada analito, por tanto, se distribuirá entre ambas fases según un equilibrio caracterizado poruna constante denominada “constante de distribución”, “coeficiente de distribución” o “coeficiente de reparto” (K).

donde, ss es la concentración de soluto, s, en fase estacionaria y sm es la concentración de soluto, s, en fase móvil. Cuanto mayor sea el valor de K, mayor será la afinidad del soluto por la fase estacionaria y, por tanto, menor la velocidad de desplazamiento a través de lacolumna. La concentración de cada analito, se representa en función del volumen de la fase móvil o del tiempo transcurrido desde la introducción de la muestra, obteniéndose una gráfica denominada cromatograma que contiene diferentes picos, cada uno de los cuales se corresponde con un analito diferente (Legas et al., 2011)

Uracilo
Es una pirimidina y una de las cuatro bases nitrogenadas que forman...