Hplc nuevo
Páginas: 6 (1288 palabras)
Publicado: 20 de junio de 2011
CARACAS 11 DE NOVIEMBRE DE 2008
OBJETIVOS
Objetivo general
Determinar el contenido de cafeína en un refresco (COCA-COLA) por HPLC.
Objetivos específicos
Determinar el contenido de cafeína en la muestra problema aplicando el método de calibración absoluta.
Determinar la exactitud y la precisión de los resultados analíticos obtenidos a través del método aplicado.PARTE EXPERIMENTAL
Instrumentación
Cromatógrafo de líquidos de alta eficiencia: Jasco L6-2080-02 Terniary gradient, Jasco PU-2080 plus HPLC pump, Desgasys Populaire.
Detector: UV/Vis – 2075 plus ( Fotomultiplicador)
Jeringa: Tipo Hamilton, apreciación: 2 μL
Columna de acero Inoxidable (C18) Longitud: 250 mm Diámetro interno: 4.6 mm y Tamaño de partícula: 5 (μm)
Preparación delSistema HPLC
1. Emplear eluentes grado HPLC.
2. Filtrar los eluentes a utilizar en la práctica.
3. Desgasificar los eluentes por un tiempo aproximado de 10 min con ultrasonido o 3 min con burbujeo de gas He.
4. Realizar la purga del equipo mediante la apertura de la válvula de la bomba (solo dar dos vueltas), y colocar el flujo en el botón designado como 2/flow en un valor de 5 mL/min.presionar enter para dejar este valor como preestablecido luego de esto presionar el botón “pump” para encender la bomba y dejar la purga por 5 min. aproximadamente.
5. Como se empleo un solo eluente se colocó la salida de estos de forma manual.
6. Colocar el flujo en 0,2 mL/min. y luego cerrar la válvula y de esta manera se hace pasar el eluente por la columna y las demás conexionescontiguas a la bomba. Al estabilizarse la presión se puede ir aumentando el flujo de 0,1 en 0,1 mL/min hasta llegar a 1 mL/min.
7. Una vez realizados los pasos anteriores puede procederse a inyectar la muestra a analizar y los patrones para la cuantificación.
Condiciones Experimentales
Volumen de inyección 10μL
Detección a 254nm
Flujo: 1mL/min
Fase móvil: 60% agua, 40%metanol
Preparación de los patrones
Se preparó una madre de 2000ppm de cafeína
De la madre de 2000ppm se preparó un patrón de 100ppm
Del patrón de 100ppm se prepararon cuatro patrones
Patrón de 36ppm Patrón de 28ppm Patrón de 20ppm Patrón de 12ppm
Se inyectaron por triplicado los patrones en el cromatógrafo para obtener la curva de calibración en lacual se graficaron los promedios de las áreas de cada uno de los patrones en función de la concentración de cada uno de los patrones
NOTA: Todos los patrones fueron filtrados antes de ser inyectados en el cromatógrafo.
Preparación de la muestra
La muestra fue desgasificada en el ultrasonido por 15 min.
Se tomaron 25ml de la muestra por duplicado y fueron llevadas a un volumen de100ml, se filtro y se inyectaron por triplicado en el cromatógrafo
RESULTADOS
Tabla 1. Áreas promedio de los patrones utilizadas para realizar la curva de calibración
Patrón ppm (Área de pico promedio ± S) cm2
12,522 (21 ± 1) X104
20,87 (49 ± 5) X104
29,218 ( 77 ± 2) X104
37,566 (11 ± 0,01) X105
Ecuación de la curva de calibración de los patrones
Y = 26704X
En elapéndice se encuentra la grafica de la cual proviene la ecuación de arriba
En el apéndice se encuentran los cálculos y resultados para las concentraciones de cafeína en las dos corridas de cada una de las muestras.
Tabla 2. Concentraciones promedios de cafeína para cada una de las muestras.
MUESTRA (CONCENTRACIÓN promedio DE CAFEINA ± S) ppm
1 (24 ± 1)
2 (23 ± 1)
3 (21,2 ±0,2)
En el apéndice se encuentran los cálculos para obtener la concentración de cafeína en el refresco coca-cola.
Tabla 3. Concentración de cafeína en el refresco coca-cola
CONCENTRACIÓN DE CAFEINA EN LA COCA-COLA ± S)
(92 ± 4) ppm
Preparación de la madre
Para la preparación de la madre se pesaron (0,2087 ± 0,0001)g de cafeína y fueron enrazados en un balón de 100mL....
OBJETIVOS
Objetivo general
Determinar el contenido de cafeína en un refresco (COCA-COLA) por HPLC.
Objetivos específicos
Determinar el contenido de cafeína en la muestra problema aplicando el método de calibración absoluta.
Determinar la exactitud y la precisión de los resultados analíticos obtenidos a través del método aplicado.PARTE EXPERIMENTAL
Instrumentación
Cromatógrafo de líquidos de alta eficiencia: Jasco L6-2080-02 Terniary gradient, Jasco PU-2080 plus HPLC pump, Desgasys Populaire.
Detector: UV/Vis – 2075 plus ( Fotomultiplicador)
Jeringa: Tipo Hamilton, apreciación: 2 μL
Columna de acero Inoxidable (C18) Longitud: 250 mm Diámetro interno: 4.6 mm y Tamaño de partícula: 5 (μm)
Preparación delSistema HPLC
1. Emplear eluentes grado HPLC.
2. Filtrar los eluentes a utilizar en la práctica.
3. Desgasificar los eluentes por un tiempo aproximado de 10 min con ultrasonido o 3 min con burbujeo de gas He.
4. Realizar la purga del equipo mediante la apertura de la válvula de la bomba (solo dar dos vueltas), y colocar el flujo en el botón designado como 2/flow en un valor de 5 mL/min.presionar enter para dejar este valor como preestablecido luego de esto presionar el botón “pump” para encender la bomba y dejar la purga por 5 min. aproximadamente.
5. Como se empleo un solo eluente se colocó la salida de estos de forma manual.
6. Colocar el flujo en 0,2 mL/min. y luego cerrar la válvula y de esta manera se hace pasar el eluente por la columna y las demás conexionescontiguas a la bomba. Al estabilizarse la presión se puede ir aumentando el flujo de 0,1 en 0,1 mL/min hasta llegar a 1 mL/min.
7. Una vez realizados los pasos anteriores puede procederse a inyectar la muestra a analizar y los patrones para la cuantificación.
Condiciones Experimentales
Volumen de inyección 10μL
Detección a 254nm
Flujo: 1mL/min
Fase móvil: 60% agua, 40%metanol
Preparación de los patrones
Se preparó una madre de 2000ppm de cafeína
De la madre de 2000ppm se preparó un patrón de 100ppm
Del patrón de 100ppm se prepararon cuatro patrones
Patrón de 36ppm Patrón de 28ppm Patrón de 20ppm Patrón de 12ppm
Se inyectaron por triplicado los patrones en el cromatógrafo para obtener la curva de calibración en lacual se graficaron los promedios de las áreas de cada uno de los patrones en función de la concentración de cada uno de los patrones
NOTA: Todos los patrones fueron filtrados antes de ser inyectados en el cromatógrafo.
Preparación de la muestra
La muestra fue desgasificada en el ultrasonido por 15 min.
Se tomaron 25ml de la muestra por duplicado y fueron llevadas a un volumen de100ml, se filtro y se inyectaron por triplicado en el cromatógrafo
RESULTADOS
Tabla 1. Áreas promedio de los patrones utilizadas para realizar la curva de calibración
Patrón ppm (Área de pico promedio ± S) cm2
12,522 (21 ± 1) X104
20,87 (49 ± 5) X104
29,218 ( 77 ± 2) X104
37,566 (11 ± 0,01) X105
Ecuación de la curva de calibración de los patrones
Y = 26704X
En elapéndice se encuentra la grafica de la cual proviene la ecuación de arriba
En el apéndice se encuentran los cálculos y resultados para las concentraciones de cafeína en las dos corridas de cada una de las muestras.
Tabla 2. Concentraciones promedios de cafeína para cada una de las muestras.
MUESTRA (CONCENTRACIÓN promedio DE CAFEINA ± S) ppm
1 (24 ± 1)
2 (23 ± 1)
3 (21,2 ±0,2)
En el apéndice se encuentran los cálculos para obtener la concentración de cafeína en el refresco coca-cola.
Tabla 3. Concentración de cafeína en el refresco coca-cola
CONCENTRACIÓN DE CAFEINA EN LA COCA-COLA ± S)
(92 ± 4) ppm
Preparación de la madre
Para la preparación de la madre se pesaron (0,2087 ± 0,0001)g de cafeína y fueron enrazados en un balón de 100mL....
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