HPLC y CG
Páginas: 4 (962 palabras)
Publicado: 16 de junio de 2013
TRABAJO PRÁCTICO N 7
Cromatografía de gaseosa (CG) y Cromatografía liquida de alta resolución (HPLC)
Alumna:
Cajón 120
Miércoles 9-16 hs
Objetivo
Conocer los fundamentos y aplicarlas técnicas cromatográficas CG y HPLC en la identificación de compuestos.
Datos experimentales
CG
Para esta técnica se utilizó una muestra derivatizada de azucares. Para ello se prepararonacetatos de alditoles a partir de una muestra incógnita de azúcares dada por los docentes.
Primero se verificó que el pH de la solución acuosa de carbohidratos fuera mayor a 7. Para llevar lasolución a este pH se agregaron gotas de NaOH diluido. Luego se adicionó una punta de espátula de NaBH4 (aproximadamente 20 mg). Se dejó reaccionar durante 90 minutos. Luego se agregó AcOH (g), hasta pH5. Se llevó al rotavapor, se agregaron 3 ml de metanol y se secó para eliminar el borato residual como borato de metilo.
Los alditoles formados se acetilaron por agregado de 0,5 ml de piridina y 0,5ml de anhídrido acético, calentando durante 30 min a 80°C. La solución se enfrío y se extrajo con cloruro de metileno: agua en proporción 1:1.
La fase acuosa se separó con pipeta Pasteur y se volvióa extraer con cloruro de metileno. El extracto orgánico combinado se evaporó en rotavapor y el residuo obtenido se disolvió en cloruro demetileno antes de inyectar en el cromatógrafo gaseoso. Con este procedimiento se logró la acetilación de los alditolesque le confiere a los azúcares volatilidad y que sean térmicamente estables para poder ser utilizados en este tipo de cromatografía.
El equipo utilizado era un Shimadzu GC - 17ª con Detector FID(flame ionization detector) que permite detectar compuestos de carbonos unidos a hidrógenos, presentes en la mayoría de los compuestos orgánicos.
El gas carrier utilizado fue nitrógeno. La temperatura...
Cromatografía de gaseosa (CG) y Cromatografía liquida de alta resolución (HPLC)
Alumna:
Cajón 120
Miércoles 9-16 hs
Objetivo
Conocer los fundamentos y aplicarlas técnicas cromatográficas CG y HPLC en la identificación de compuestos.
Datos experimentales
CG
Para esta técnica se utilizó una muestra derivatizada de azucares. Para ello se prepararonacetatos de alditoles a partir de una muestra incógnita de azúcares dada por los docentes.
Primero se verificó que el pH de la solución acuosa de carbohidratos fuera mayor a 7. Para llevar lasolución a este pH se agregaron gotas de NaOH diluido. Luego se adicionó una punta de espátula de NaBH4 (aproximadamente 20 mg). Se dejó reaccionar durante 90 minutos. Luego se agregó AcOH (g), hasta pH5. Se llevó al rotavapor, se agregaron 3 ml de metanol y se secó para eliminar el borato residual como borato de metilo.
Los alditoles formados se acetilaron por agregado de 0,5 ml de piridina y 0,5ml de anhídrido acético, calentando durante 30 min a 80°C. La solución se enfrío y se extrajo con cloruro de metileno: agua en proporción 1:1.
La fase acuosa se separó con pipeta Pasteur y se volvióa extraer con cloruro de metileno. El extracto orgánico combinado se evaporó en rotavapor y el residuo obtenido se disolvió en cloruro demetileno antes de inyectar en el cromatógrafo gaseoso. Con este procedimiento se logró la acetilación de los alditolesque le confiere a los azúcares volatilidad y que sean térmicamente estables para poder ser utilizados en este tipo de cromatografía.
El equipo utilizado era un Shimadzu GC - 17ª con Detector FID(flame ionization detector) que permite detectar compuestos de carbonos unidos a hidrógenos, presentes en la mayoría de los compuestos orgánicos.
El gas carrier utilizado fue nitrógeno. La temperatura...
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