HPLC

Practica No. 2 Grupo y Carrera: D04 EQAyC No. De Lista: 10
Nombre: García Rivas Ana Miriam Equipo de Trabajo No. 2

Identificación y cuantificación de Acetaminofen en un producto farmacéutico usando cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC)

Objetivo: Observar el manejo delaparato, sus variables de operación. Aprender la metodología para la preparación de una muestra problema previo al análisis instrumental para identificar y cuantificar por HPLC un componente por estándar externo.

Teoría: Una muestra que contiene varios componentes con diferente polaridad puede ser separada para identificar y cuantificar sus componentes si se introduce a una columna que contieneuna fase fija no polar. Si después se eluye con un solvente polar, los componentes afines al solvente saldrán primero y los compatibles con la fase estacionaria saldrán después.

SI se desea cuantificar algún(os) compuesto(os) de interés de una muestra, una opción variable en la técnica de cuantificación estándar externo, en esta, generalmente se realizan dos inyecciones una de un patrón deconcentración conocida y la segunda de la muestra problema. Es importante notar que el patrón y el problema deben ser la misma sustancia. La técnica se aplica ampliamente en cromatografía de líquidos.
Compara las áreas o alturas de los picos, se puede cuantificar la cantidad de analito presente en la muestra.
Datos presuntos de la muestra:
Se analizó un medicamento de la marca GENEXX, quecontenía como principio activo Naproxeno en una concentración 2.5 grs. y paracetamol con una concentración de 3.2 grs.

Materiales:
Mortero
Matraces y pipetas volumétricas
Micro jeringa




Equipos e instrumentación:
Centrifuga
Sistema para obtención de agua grado cromatográfico
Sistema de filtración al vacio
Balanza Analítica
Bomba cromatográfica
Inyección manual
Detector UV/VisComputadora
Impresora


Reactivos:
Agua grado HPLC
Metanol grado HPLC
Acetaminofen QP
Soluciones
2 PPM de Acetaminofen
Agua metanol 50:50




Procedimiento y parámetros instrumentales:
Se investigo una amplia gama de medicamentos que contenía Acetaminofen en el mercado y se selecciono un medicamento de la marca Genexx.
Con los datos obtenidos de la concentración de Acetaminofencontenidos en la etiqueta del medicamento, se realizaron los cálculos pertinentes para poder hacer diluciones y obtener una concentración de que fuera de 2PPM aproximadamente
La muestra a analizar contenía 3.2 grs. De Acetaminofen en 100 ml, por lo cual se contenía 32,000 PPM. Y de ahí se realizaron 3 diluciones; de la primera se tomo un mililitro del medicamento con una pipeta volumétrica y se llevo amatraz de afore de 50 ml, de ahí se tomo otro mililitro y se aforaron a 50 ml, por último se tomaron 2 ml y se llevaron a un afore de 10 ml, obteniendo 2.53 PPM.
Nuestra solución final se filtro con un acrodisco de nylon de 0.45 um. En cada poro de 13 mm de diámetro.
Primero se dejaron pasar de a 4 a 5 gotas para limpiar el filtro y lo restante se filtro y se guardo en matraz volumétrico.
Lamuestra estándar de Acetaminofen estaba previamente preparada con una concentración de 2PPM.
Se utilizo un Cromatógrafo de líquidos de alta resolución que se acondiciono acorde a los siguientes parámetros:
COLUMNA
FASE ESTACIONARIA: C18
DIMENSIONES DE LA COLUMNA: 2.50 por 4.60 mm
FASE MOVIL
COMPONENTES: Agua-metanol (1:1)PROPORCION: 2.8 ml / min
FLUJO
PRESION: 2900 psi
DETECTOR
LONGITUD DE ONDA: 244 nm UV/Vis

Primeramente se lavo 2 veces la jeringa de inyección con la muestra estándar de Acetaminofen (2PPM), y por último se lleno con 50 μL de Acetaminofen estándar, sin que quedaran burbujas presentes en...