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CROMATOGRAFÍA LIQUIDA DE ALTA EFICACIA

INTRODUCCIÓN
Las primeras separaciones, con resultados positivos, por medio de métodos cromatográficos fueron llevadas a cabo por Tswett en el año 1.906; este botánico ruso consiguió separar
algunos pigmentos coloreados de hojas de plantas utilizando una columna de alúmina.
El desarrollo total de estas técnicas se produjo, no obstante, a partir delaño 1931, en que
Kuhn y Lederer comenzaron a utilizarlas de manera sistemática. La cromatografía de líquidos
(CL) sufrió un relativo estancamiento a partir del año 1952 en que Martin y James impulsaron
el desarrollo de la cromatografía de gases (CG), que acaparó los esfuerzos teóricos encaminados
al conocimiento profundo de la cromatografía. No obstante, las limitaciones de la CG en cuanto
altipo de muestras analizables (volátiles o derivados volátiles de las mismas), originó, en la
segunda década de los sesenta, una vuelta a considerar la CL cuyas limitaciones, en este sentido,
se reducen a la posibilidad de disolver la muestra, lo que le confiere un rango mucho más amplio
de aplicación. Este hecho, junto con la aparición de fases estacionarias con diámetros de partícula
muchomenores que los utilizados hasta entonces (3 a 25 :m), que permiten obtener columnas
de mayor eficacia, llevó a una utilización cada vez más extensa de este tipo de cromatografía.
La experiencia acumulada en el desarrollo de la CG permitió también aplicar nuevos
puntos de vista a la CL, para la que pronto se diseñaron sistemas de inyección, circulación del
eluyente y detección, de eficaciacomparable a la de los utilizados en CG, dando lugar a la
moderna técnica de cromatografía líquida de alta eficacia (CLAE).

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EL PROCESO CROMATOGRÁFICO
La cromatografía líquida de alta eficacia se encuadra dentro de la cromatografía de
elución. En ésta, un líquido (fase móvil) circula en íntimo contacto con un sólido u otro líquido
inmiscible (fase estacionaria); al introducir una mezcla desubstancias (analitos) en la corriente
de fase móvil, cada analito avanzará a lo largo del sistema con una velocidad diferente que
dependerá de su afinidad por cada una de las fases. Esto supone que después de terminado el
recorrido de la muestra por la columna, cada una de las substancias introducidas en el sistema
eluirá con un tiempo diferente, es decir, estarán separadas.

Clasificación dela cromatografía liquida
Los diferentes tipos de cromatografía líquida se pueden clasificar de diferentes maneras,
pero la forma más habitual de clasificación es la realizada en base a la naturaleza de la fase
estacionaria, ya que es ésta la que impone fundamentalmente el mecanismo de separación; de este
modo, se pueden enumerar cuatro tipos de técnicas:
- Cromatografía de adsorción(líquido-sólido).
La fase estacionaria es un adsorbente y la separación se basa en repetidas etapas
de adsorción-desorción.
- Cromatografía de reparto/adsorción (fases ligadas químicamente).
La separación en este caso, se basa en un reparto del soluto entre la fase móvil y
la fase estacionaria.
- Cromatografía de intercambio iónico.
Este tipo de cromatografía se da cuando la fase estacionariapresenta en su
superficie grupos ionizados capaces de retener selectivamente a iones de signo
contrario que circulan en la fase móvil.
- Cromatografía de exclusión molecular.
La fase estacionaria, en este caso, es un material poroso de tamaño de poro
controlado, que permite la entrada de ciertas moléculas de manera selectiva,
dejando fuera otras de mayor tamaño.
El mecanismo de retención en losdos primeros casos es similar, variando únicamente el

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tipo de interacciones que se producen y cual de ellas es la predominante; por esta razón, en la
práctica se realiza otra división de los dos primeros tipos de cromatografía atendiendo a polaridad
de la fase estacionaria:
- Cromatografía de fase normal:
La fase estacionaria presenta puntos activos de alta polaridad y las...