hplc

Determinación de caféina
Introducción
Se lleva a cabo una separación cromatográfica de cafeína y ácido benzoico mediante cromatrografía líquida de alta resolución (HPLC). En esta práctica se va adeterminar el contenido de cafeína de una bebida comercial, cuál de de los lotes de bebida no tiene cafeína y cual está contaminado con acido benzoico.
Se preparan las disoluciones de los patrones decafeína cuyas concentraciones están comprendidas entre 5 y 35 g/mL y los patrones de ácido benzoico cuyas concentraciones están comprendidas entre 15 y 65 g/mL. Se preparan los problemas de loslotes de cafeína y se procede a la cromatografía.
El HPLC consta de las siguientes partes:
Bomba de alta presión: Bombea fase móvil a través de la columna a alta presión y con una velocidad de flujocontrolada. Sus características principales son disponer de flujos variables, originar un flujo libre de pulso, facilidad para cambiar de una fase a otra, ofrecer un amplio rango de presiones y ser demateriales inatacables.
Sistemas de inyección: Introducir volúmenes pequeños de muestras en el sistema hidrodinámicos de alta presión. Aquí se usa un sistema de inyección de 6 vías.
Columnas:Dispositivo donde tiene lugar la separación. En la práctica se una columna en fase inversa C18.
Detector: Módulos situados a la salida de la columna que proporciona una señal continua. La señal esproporcional a alguna propiedad de los analitos que circulan a través de la misma. En esta práctica se emplea un sistema de diodos. La propiedad que se mide es la absorbancia mediante un espectrofotómetro.Procedimiento
Se inyectan las disoluciones de ácido benzoico y de cafeína por separada y de una mezcla binaria de ambos. Se registran sus picos en los cromatogramas por último se seleccionan laslongitudes de onda para cada uno. Una vez identificado el pico de cafeína, y en su caso del ácido benzoico, se procede a su integración. Los valores de área obtenidos se interpolan en la recta de...