Huella peptidica

Para el uso de la técnica de la huella peptídica debe disponerse de la proteína pura, o, de existir mezclas de dos o tres, debe acoplarse un MS/MS adicional. Como paso preparativo, el aislamiento de la proteína de interés suele realizarse mediante electroforesis en gel bidimensional o mediante electroforesis SDS-PAGE. Los análisis adicionales mediante MS/MS pueden ser directos, generalmentemediante MALDI-TOF/TOF o nanoLC-ESI-MS/MS análisis de los elementos recortados del gel de electroforesis bidimensional.7 8 9Las masas peptídicas experimentales de una proteína desconocida son comparadas con las masas peptídicas teóricas de proteínas presentes en bases de datos.
• Diversos algoritmos disponibles en Internet para realizar este análisis: PEPSEA, PROFOUND, MS-FIT....
• Laidentificación correcta de la proteína requiere que las masas de un gran número de péptidos coincidan con las masas teóricas de los péptidos y que cubran parte de la secuencia de la proteína en la base de datos.
Este método consiste en la hidrólisis,química o mediante el empleo de proteasas específicas, de la cadena polipeptídica originando péptidos derivados de la proteína. La mezcla de péptidos resultantesse separa, generalmente por cromatografía líquida de alta eficacia en fase reversa (rp-HPLC), para producir un mapa que en las condiciones establecidas es típico para cada proteína
Los espectrómetros de masas en tándem (MS/MS) permiten la determinación de la secuencia de aminoácidos.
• Fragmentación de un péptido específico en péptidos más pequeños que pueden utilizarse para deducir la secuenciaproteica.
• Estrategia utilizada para la identificación de:
• Proteínas sin anotar en las bases de datos.
• Ambiguedades en MS MALDI-TOF.
Un biofármaco es un producto farmacéutico que ha sido elaborado con materiales de partida (materiales a partir de los cuales se fabrica o de los que se extrae el principio activo) de origen biológico, tales como microorganismos, órganos y tejidos de origenvegetal o animal, células o fluidos de origen humano o animal y los diseños celulares (sustratos celulares, sean a no recombinantes incluidas las células primarias); así como de origen biotecnológico que se obtienen a partir de una proteína o ácido nucleico por tecnología DNA recombinante.
TERMINOLOGÍA
Productos Medicinales Biológicos Similares
Es el término oficial en Europa
A menudo seabrevia como ‘productos biosimilares’
Biológicos de continuación (follow-on)
Es el término usado actualmente en los EUA
En ocasiones se denominan ‘proteínas de continuación’
Dichos problemas por lo general no pueden ser identificados o resueltos basándose únicamente en consideraciones de composición, manufactura y control (especialmente en ausencia de pruebas “en proceso” como parte de unejercicio de comparabilidad, de conformidad con ICH Q5E) Se requieren estudios clínicos para establecer la eficacia y seguridad de todos los productos farmacéuticos biológicos, incluso si afirman ser ‘similares’ desde la perspectiva de la composición, manufactura y control.
Con las guías que están surgiendo en la Comunidad Europea, se aborda el tema en forma práctica, pero cautelosa, para el desarrollode productos farmacéuticos biológicos ‘similares’
Para asegurar la consistencia en las características de los productos finales, y los perfiles de seguridad y eficacia, la fuente del material, los procesos de manufactura, la formulación y las condiciones de almacenaje deben ser cuidadosamente seguidas y controladas, cumpliendo las exigencias GMP específicas para los productos biotecnológicos. .Complejidad del proceso de manufactura: Debe demostrarse la consistencia de producción, especificaciones del producto, impacto de cambios en el proceso de manufactura.
Inmunogenicidad: aspecto clave a considerar.
Debe vigilarse de cerca y de modo permanente la seguridad de estos productos durante la fase de post-comercialización.
En la Farmacovigilancia debe identificarse el producto...