Identificación de carbohidratos

IDENTIFICACION Y CUANTIFICACION DE AZUCARES REACCION DEL ACIDO MUCICO Este ensayo permite la identificación de la galactosa o de los azúcares que la contienen. El ácido nítrico oxida tanto al grupo aldehído como al alcohólico primario de cualquier azúcar para originar ácidos dicarboxílicos que han recibido el nombre general de ácidos sacáricos. El ácido múcico o galactárico es el menos solubleen agua acidificada de todos los ácidos sacáricos. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Colocar 700 mg de galactosa, glucosa y de la sustancia problema en distintos tubos de ensayo, a continuación añadir 1 ml de agua y 1 ml de HNO3 a cada tubo. Calentar los tubos en un baño de agua hirviendo durante una hora y luego se dejan enfriar lentamente. La reacción debe considerarse positiva si aparece unprecipitado blanco de cristales de ácido múcico. REACCION DE MOLISCH Este ensayo permite detectar la presencia de hidratos de carbono en una muestra; se basa en la acción hidrolizante y deshidratante que ejerce el ácido sulfúrico sobre estos compuestos. Como se sabe, los ácidos concentrados originan una deshidratación de los azúcares para rendir furfurales, que son derivados aldehídicos del furano. Losfurfurales se condensan con los fenoles para dar productos coloreados característicos, empleados frecuentemente en el análisis colorimétrico. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL En un tubo de ensayo se depositan 10 ml de una disolución al 5% de la muestra a ensayar, en un segundo tubo de ensayo se deposita la misma cantidad de una disolución también al 5% de un hidrato de carbono conocido (glucosa). Seañaden unas gotas de reactivo de Molisch (α-naftol al 5% en etanol) y se mezcla el contenido. Inclínense los tubos y déjese resbalar cuidadosamente 1 ml de ácido SO4H2 concentrado a lo largo de la pared del tubo de manera que se forme una capa bajo la fase acuosa. A continuación se calientan los tubos en un baño de agua unos minutos. La reacción es positiva si se forma un anillo rojo violáceo en lainterfase. Esta reacción la dan todos los azúcares por lo que debe llevarse a cabo evitando la presencia de restos de papel de filtro o materiales similares en los tubos de ensayo.

REACCION DE FEHLING Este ensayo pone de manifiesto la presencia de azucares reductores (aldosas: glucosa, ribosa, eritrosa, etc.). Se trata de una reacción redox en la que el grupo aldehído (reductor) de los azúcareses oxidado a grupo ácido por el Cu2+ que se reduce a Cu+. Tanto los monosacáridos como los disacáridos reductores reaccionan con el Cu2+ dando un precipitado rojo de oxido cuproso. La reacción tiene lugar en medio básico por lo que es necesario introducir en la reacción tartrato sódico-potásico para evitar la precipitación del hidróxido cúprico. La prueba de Fehling no es específica; otrassustancias que dan reacción positiva son los fenoles, aminofenoles, benzoína, ácido úrico, catecol, ácido fórmico, hidrazobenceno, fenilhidrazina, pirogalol y resorcinol. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL El reactivo de Fehling consta de dos disoluciones que se mezclan a partes iguales en el momento de su utilización. La solución I esta formada por SO4Cu* 5H2O al 7% en agua y la solución II por tartratosódico-potásico al 35% en NaOH al 10% en agua. En un tubo se disuelven 500 mg de la sustancia a ensayar en 5 ml de agua. Se procede de igual manera con otros tubos que contengan azúcares reductores y no reductores conocidos. A continuación se añaden a todos los tubos 5 ml del reactivo de Fehling. Finalmente se someten a ebullición en baño de agua durante 5 minutos. La reacción debe considerarsepositiva si se forma un precipitado rojo de óxido cuproso. REACCION DE BARFOED Este ensayo se emplea para diferenciar a los mono de los disacáridos. Estos últimos reaccionan más lentamente con el acetato cúprico, debido probablemente al tamaño molecular, aunque también pueden estar implicados otros factores tales como una interacción más compleja con los dos anillos monosacáridos.

PROCEDIMIENTO...