Identificación Del Mutans Y Otros Estreptococos Por El Ánalisis De Amplificación Polimorfico Del Dna Al Azar (Rapd)

Identificación del Mutans y otros estreptococos por el ánalisis de amplificación polimorfico del DNA al azar (RAPD)

Ha sido reconocido desde hace mucho tiempo que la identificación y clasificación de estreptococos viridans no hemolíticos como difícil y no satisfactoria. La heterogeneidad fenotípica y genotípica ha dado lugar a una ambigua clasificación, particularmente del estreptococo mutansy otros estreptococos orales. Este estudio fue realizado para determinar si el análisis amplificado polimorfico del DNA al azar, es útil para identificar e inclusive clasificar estreptococos orales y otros. El DNA fue preparado y purificado de 25 cepas del S. Mutans incluyendo: 11 cepas referentes al S. Mutans, 7 del S. Sobrinus, 3 del S. Rattus y una de cada una de las otras 4 especies del S.Mutans La amplificación junto con otras 20 especies referentes en su mayoría a los estreptococos, y de 49 nuevos aislamientos de S. Mutans de la saliva humana y de la placa dental.
La amplificación del DNA se cebó arbitrariamente con tres cebadores seleccionados de 9 a 10 nucleótidos en longitud. Los fragmentos de DNA amplificado (amplicones) obtenidos fueron comparados por electroforésis en gelde agarosa.
Especies y huellas dactilares del RAPD de cepas específicas fueron obtenidas no sólo del ADN genomico puro, sino también del sobrenadante celular crudo o de extractos de colonias.
Dependiendo del análisis de numerosas otras cepas, los datos sugieren que el RAPD es muy valioso para :- Distinguir especies del S. Mutans con respecto al S. Sobrinus y potencialmente de otras especiesestreptocócicas orales;-Diferenciar y clasificar posiblemente estreptococos orales y como herramienta en estudios de transmisión y epidemiología del S. Mutans en virtud de su rapidez, eficiencia y reproducibilidad en generar huellas dactilares genéticas de los estreptococos.

INTRODUCCION

Los estreptococos no hemolíticos o grupo viridans son uno de los mayores componentes de la microbiota oral yse convierten en patógenos oportunistas. Este grupo consisten varios taxones e incluye el grupo del estreptococo mutans. Debido a que el S. Mutans es genéticamente heterogéneo, fue dividido en 7 especies. El miembro más común de la familia del S. Mutans es como su nombre lo indica el S. Mutans: la mayoría de los humanos portan este estreptococo en la placa dental, un pequeño porcentaje de personastiene el S. Sobrinus en vez del anterior. El S. Rattus y el S. Cricetus pueden ser encontrados en algunas poblaciones pero no son comunes. Las otras especies S. Ferus, S. Macaco y S. Downei son únicamente encontrados en animales. La identificación y clasificación de estreptococos viridans ha sido realmente difícil y no satisfactoria y esto ha sido basado en observaciones morfológicas, bioquímicasy test fisiológicos y de reacción antigénica. Debido a la heterogeneidad fenotípica y genotípica de estreptococos orales, nuevas especies son continuamente propuestas. El fenotipo y el serotipo se basa en la expresión genética que consecuentemente es inestable, por eso la caracterización basada en el ADN es ahora extensamente aceptada. Diversos métodos moleculares escritos están presentementeaprovechados y algunos de ellos han sido aplicados a los S. Orales. Ellos incluyen la hibridación DNA-DNA, análisis restrictivo de la endonucleasa, electroforesis de enzimas multiloculares, ribotipificación, PCR e hibridación con sondas de ADN. El PCR, procedimiento basado en las huellas dactilares del ADN, llamado arbitrariamente Primed PCR o análisis amplificado polimórfico al azar del ADN ha sidoaplicado para la identificación de cepas y bacterias orales como son los estreptococos orales y los no orales. El presente estudio utilizó el RAPD para tipificar cepas del S. Mutans y del S. Sobrinus y para explorar el potencial de este método tipificador para distinguir los estreptococos anteriormente nombrados de los otros grupos taxonómicos que componen el gran grupo de estreptococos...