IDENTIFICACION DE AMINOACIDOS POR CROMATOGRAFIA

LABORATORIO N°4
IDENTIFICACION DE AMINOACIDOS POR CROMATOGRAFIA


VANESSA PACHON ADARME
COD: 201220295
JENIFFER SÁNCHEZ SALDAÑA
COD: 201223568
TATIANA VARGAS MONROY
COD: 201220431


MATERIA: BIOQUIMICA
PROF: CECILIA ESPINDOLA



FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
INGENIERIA AGRONOMICA
UNIVERSIDAD PEDAGOGICA Y TECNOLOGICA DE COLOMBIA
TUNJA
2013


PRELABORATORIO

a.Realice el diagrama de flujo correspondiente a la práctica.
b. Consulte la estructura química de los aminoácidos que se utilizaran en la práctica.

GLUTAMATO



GLICINA






LISINA


PROLINA

LEUCINA





RESUMEN
Como primera instancia se tomó la placa de silicagel para cromatografía en capa fina, y se le trazó con lápiz, una línea recta a los 2 cm de distancia de la puntahasta la medida. Una vez se hizo esto, se ubicaron tres puntos, cada uno fue identificado con los nombres de los dos aminoácidos (Prolina y Lisina) y de la muestra problema que nos correspondió usar en la experiencia. A partir de esto, se tomaron 3 tubos de ensayo en los cuales se añadió 1 ml de la muestra problema y …. De Prolina y Lisina. De cada solución que se tenía en los diferentes tubos deensayo se procedió a aplicar tres gotas con un capilar diferente para cada uno, en los puntos que se marcaron en la placa con sus nombres. Luego de haber echo esto, se coloco la placa en el vaso de precipitado que contenía 1 cm de ………. . ; se tapó y se dejo desarrollar la cromatografía hasta que el eluyente alcanzo su tope máximo, en este caso llegó a 2.5 a 3 cm de distancia del borde superior.Terminada la cromatografía, se sacó la placa y se marcó la distancia recorrida por el eluyente, y con ayuda de la laboratorista se roció con un pulverizador que contiene la solución reveladora, y con ayuda de la plancha se secó la placa, en donde se reflejaron los diferentes colores de los aminoácidos y de la muestra problema. Con esto se finaliza la práctica obteniendo los resultados esperados de laexperiencia.

INTRODUCCION
El estudio y caracterización de las distintas biomoléculas (azúcares, lípidos, proteínas, ácidos nucleicos, etc.) requiere en numerosos casos su aislamiento y purificación a partir de mezclas complejas como son los preparados de cualquier material biológico. Una de las técnicas bioquímicas más clásicas y utilizadas para dicho fin es la cromatografía. La cromatografíaincluye una amplia gama de técnicas, que se pueden clasificar atendiendo al fundamento físico-químico en el que se basa la separación (cromatografía de adsorción, de reparto, de cambio iónico, de filtración molecular, hidrofóbica y de afinidad), o al material sobre el que se lleva a cabo (cromatografía en papel, capa fina, en columna y de gases). Todas las técnicas intentan explotar lasdiferencias físicas, químicas y biológicas de las distintas biomoléculas para llevar a cabo su separación y aislamiento. (Matheus y Ahern 2005)
Entre dichas propiedades podríamos citar:
I. Diferencias en solubilidad en diferentes solventes, tanto orgánicos como acuosos.
II. Diferencias en tamaño y forma.
III. Diferencias en carga.
IV. Diferencias en afinidad por otras biomoléculas.
Todas estaspropiedades y, por tanto, la separación de diferentes compuestos están influenciadas por las condiciones del medio de separación, pH, temperatura, fuerza iónica e hidrofobicidad. (Murray et. Al 2003). Por lo anterior los objetivos del laboratorio fueron: determinar la separación de aminoácidos por cromatografía en capa fina sobre gel de sílice, realizar el revelado de los aminoácidos mediante lareacción coloreada con la ninhidrina y calcular el valor de Rf para cada uno de los aminoácidos.


MATERIALES Y METODOS

Los materiales que se usaron el en laboratorio fueron:
Placa de silicagel para cromatografía en capa fina
Pipetas (o.5, 1.0, 2.0, 10 y 25 ml)
Probetas (100 y 250 ml)
Frasco lavador con agua destilada
Recipientes de muestras biológicas de 50 ml
Papel parafilm...