Identificacion de aminoacidos

LABORATORIO DE BIOQUIMICA

IDENTIFICACION DE AMINOACIDOS POR REACIONES COLORIDAS UTILIZANDO CLARA DE HUEVO
OBJETIVO
El alumno identificara aminoácidos presentes en proteínas de origen animal y vegetal, utilizando reacciones coloridas

INTRODUCCION
Ciertas reacciones coloridas mencionadas como especificas para aminoácidos, también son útiles para descubrir la presencia de proteínas quecontengan los aminoácidos para los cuales están indicadas estas reacciones.
Estas incluyen a las pruebas de Millon, xantoprotéicas, biuret y la de Ninhidrina, asi como la de Hopkins-Cole (acido glioxilico).
La reacción de Biuret específica para las uniones peptídicas también se usan como prueba para la presencia de proteínas.

MATERIAL Y REACTIVOS
Material biológico
Clara de huevo diluidaReactivos
H2SO4 Conc. NaOH al 40% CuSO4 al 1%disolución de ninhidrina acetato de plomo 1M NH4OH 10%acido clorhídrico 6M HNO3 Conc.CH3COOH Conc.

PROCEDIMIENTO
REACCION DE BIURET
A 2 ml de clara de huevo diluida, agregue lentamente y agitando 1 ml de disolución NaOH al 40%.
Después agrege gota a gota y agitando, 1 ml de disolución de CuSO4 al 1 %. Anote el cambio de color. Observe que un exceso de sulfato de cobre por su color propio puede enmarcar lareacción.
REACCION DE NINHIDRINA
En un tubo de ensaye ponga 1 ml de clara de huevo diluida. Agregue 1 ml de reactivo de Ninhidrina y caliente suavemente hasta que se observe un cambio de color. La producción de un color azul o rojo violeta indica que si contiene aminoácidos.
REACCION DE XANTOPROTEICA
A 1 ml de clara de huevo diluida agregue lentamente y agitando 1 ml de NHO3 concentrado. Calientehasta que hierva suavemente y anote el color.
Deje enfriar y añada gota agota solución NaOH al 40% hasta alcalinizar (checar con papel PH hasta obtener un PH de 8 o mayor).anote el cambio. El color amarillo nos indica que contiene tirosina.
REACCION CON ACETATO DE PLOMO EN MEDIO ALCALINO
A 2 ml de clara de huevo diluida agregue 5 gotas de NaOH al 40%, agite bien, caliente en mechero o en bañomaria el tubo hasta que hierba durante 2 minutos, agregar 4 gotas de acetato de plomo 1M y 3 ml de acido clorhídrico 6M CUIDADOSAMENTE, identifique el olor que desprende y anote sus resultados. El cambio a color café nos indica la presencia de aminoácidos que contiene azufre (cistina, cisteína y metionina).
REACCION DE HOPKINS-COLE
En tubo de ensaye coloque 1 ml de clara de huevo diluida,agregue 2 ml de acido acético concentrado (el cual contiene como impureza acido glioxilico) y mezcle bien. Incline el tubo y vierta cuidadosamente deslizando por las paredes y sin agitar 1 ml de H2SO4 concentrado.
Se forma un anillo de color violeta, a nivel de la superficie de separación de los liquidos, lo que indica la presencia de triptofano.

RESULTADOS
Reacción | Clara de huevo |
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