Identificacion De Hsp 70
Páginas: 11 (2676 palabras)
Publicado: 11 de agosto de 2012
Identificación de Hsp70 mediante shock-térmico en hemocitos de Choromytilus Chorus.
Andrea Briceño, Francisca Cisterna, Matías Gallardo y Scarleth Montecino.
Laboratorio de Fisiología Celular
Pontificia Universidad Católica de Valparaíso.
Instituto de Química. Facultad de ciencias, Curauma, Valparaíso, Chile.
ABSTRACT
By subjecting cells to heat stress occurs the expression ofthe chaperone protein Hsp70 that is responsible for assisting the correct folding of denatured proteins. In this work we studied the effect of heat stress on the expression of Hsp70 at different temperatures. Was used as a working unit hemocytes obtained from hemolymph of the bivalve molluscs Choromytilus Chorus. The experiment was divided into three conditions: a control condition, induction at25°C and an induction at 35°C. The result was an increase of the expression of the 70 KDa protein in line with the increase of temperature.
RESUMEN
Al someter células a estrés térmico se produce la expresión de la proteína chaperona Hsp70 que se encarga de asistir el correcto plegamiento de proteínas desnaturadas. En este trabajo se estudió el efecto del estrés térmico sobre la expresión deHsp70 a diferentes temperaturas. Se empleó como unidad de trabajo hemocitos obtenidos de hemolinfa del molusco bivalvo Choromytilus Chorus. El experimento se dividió en tres condiciones: una condición control, inducción a 25°C e inducción a 35°C. Se obtuvo como resultado un aumento de la expresión de la proteína de 70KDa en concordancia con el aumento de la temperatura.
INTRODUCCIÓN
Todacélula responde ante el estrés como una forma de supervivencia ante el daño causado por exposición a factores ambientales como calor, metales pesados, radiación UV, etc. Ante esto, la célula sintetiza rápidamente una serie de proteínas de choque térmico llamadas chaperonas [1]. Las chaperonas constituyen un amplio número de proteínas, algunas de las cuales se encuentran constantementeexpresadas, mientras que otras lo hacen sólo luego de una condición de estrés. Estas proteínas se encuentran altamente conservadas evolutivamente en distintos organismos y microorganismos ya sean eucariontes o procariontes. Las chaperonas que responden a estrés térmico son las Hsp (Heat shock proteins) que se clasifican según sus pesos moleculares como por ejemplo las Hsp40, Hsp70 y Hsp90 de pesosmoleculares 40, 70 y 90 KDa respectivamente. Las familias de las Hsp70 intervienen en plegamiento, ensamblaje y translocación a través de compartimentos celulares, es por esto que se encuentran en el citosol, mitocondria y retículo endoplasmático.
Se ha demostrado en estudios anteriores que al inducir células mediante shock térmico, se produce el incremento en la expresión de las Hsp principalmente lade peso molecular de 70 KDa, que es la encargada de reconocer las zonas hidrofóbicas de las proteínas desplegadas estabilizándolas y dirigiendo el plegamiento correcto de estos polipéptidos [2].
Se han realizado estudios de la expresión de Hsp70 en el bivalvo Ostrea Edulis, donde al inducir temperaturas mayores a 32ºC, se observó la expresión de Hsp69 en branquias y manto, luego de un períodode recuperación de 3 a 48 horas, sin embargo, a temperaturas por sobre 38ºC, su expresión disminuye debido a que a esa temperatura resulta ser letal para los ostiones [3].
En el molusco Mytilus Galloprovincialis también se evaluó el efecto del estrés térmico sobre la expresión de proteínas en manto, donde se observó que los moluscos expuestos a 4ºC por 5 minutos incrementaban la expresión deproteínas de 35 y 11,5 KDa mientras que la Hsp72 no mostró cambios significativos bajo esta condición. Sin embargo, se observó el máximo de expresión de la Hsp70 en los primeros 5 minutos bajo la condición de temperatura de 40ºC. Por otro lado en hemocitos se observó un decaimiento de la expresión de una proteína de 75 KDa a 4ºC, mientras que a 40ºC se expresaron proteínas de 65 y 46,5 KDa,...
Andrea Briceño, Francisca Cisterna, Matías Gallardo y Scarleth Montecino.
Laboratorio de Fisiología Celular
Pontificia Universidad Católica de Valparaíso.
Instituto de Química. Facultad de ciencias, Curauma, Valparaíso, Chile.
ABSTRACT
By subjecting cells to heat stress occurs the expression ofthe chaperone protein Hsp70 that is responsible for assisting the correct folding of denatured proteins. In this work we studied the effect of heat stress on the expression of Hsp70 at different temperatures. Was used as a working unit hemocytes obtained from hemolymph of the bivalve molluscs Choromytilus Chorus. The experiment was divided into three conditions: a control condition, induction at25°C and an induction at 35°C. The result was an increase of the expression of the 70 KDa protein in line with the increase of temperature.
RESUMEN
Al someter células a estrés térmico se produce la expresión de la proteína chaperona Hsp70 que se encarga de asistir el correcto plegamiento de proteínas desnaturadas. En este trabajo se estudió el efecto del estrés térmico sobre la expresión deHsp70 a diferentes temperaturas. Se empleó como unidad de trabajo hemocitos obtenidos de hemolinfa del molusco bivalvo Choromytilus Chorus. El experimento se dividió en tres condiciones: una condición control, inducción a 25°C e inducción a 35°C. Se obtuvo como resultado un aumento de la expresión de la proteína de 70KDa en concordancia con el aumento de la temperatura.
INTRODUCCIÓN
Todacélula responde ante el estrés como una forma de supervivencia ante el daño causado por exposición a factores ambientales como calor, metales pesados, radiación UV, etc. Ante esto, la célula sintetiza rápidamente una serie de proteínas de choque térmico llamadas chaperonas [1]. Las chaperonas constituyen un amplio número de proteínas, algunas de las cuales se encuentran constantementeexpresadas, mientras que otras lo hacen sólo luego de una condición de estrés. Estas proteínas se encuentran altamente conservadas evolutivamente en distintos organismos y microorganismos ya sean eucariontes o procariontes. Las chaperonas que responden a estrés térmico son las Hsp (Heat shock proteins) que se clasifican según sus pesos moleculares como por ejemplo las Hsp40, Hsp70 y Hsp90 de pesosmoleculares 40, 70 y 90 KDa respectivamente. Las familias de las Hsp70 intervienen en plegamiento, ensamblaje y translocación a través de compartimentos celulares, es por esto que se encuentran en el citosol, mitocondria y retículo endoplasmático.
Se ha demostrado en estudios anteriores que al inducir células mediante shock térmico, se produce el incremento en la expresión de las Hsp principalmente lade peso molecular de 70 KDa, que es la encargada de reconocer las zonas hidrofóbicas de las proteínas desplegadas estabilizándolas y dirigiendo el plegamiento correcto de estos polipéptidos [2].
Se han realizado estudios de la expresión de Hsp70 en el bivalvo Ostrea Edulis, donde al inducir temperaturas mayores a 32ºC, se observó la expresión de Hsp69 en branquias y manto, luego de un períodode recuperación de 3 a 48 horas, sin embargo, a temperaturas por sobre 38ºC, su expresión disminuye debido a que a esa temperatura resulta ser letal para los ostiones [3].
En el molusco Mytilus Galloprovincialis también se evaluó el efecto del estrés térmico sobre la expresión de proteínas en manto, donde se observó que los moluscos expuestos a 4ºC por 5 minutos incrementaban la expresión deproteínas de 35 y 11,5 KDa mientras que la Hsp72 no mostró cambios significativos bajo esta condición. Sin embargo, se observó el máximo de expresión de la Hsp70 en los primeros 5 minutos bajo la condición de temperatura de 40ºC. Por otro lado en hemocitos se observó un decaimiento de la expresión de una proteína de 75 KDa a 4ºC, mientras que a 40ºC se expresaron proteínas de 65 y 46,5 KDa,...
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