Identificacion proteinas


PRÁCTICA NO. 3
IDENTIFICACIÓN BIOMOLÉCULAS

OBJETIVO.
Realizar las reacciones de ninhidrina, Biuret y lugol para la identificación de biomoléculas

INTRODUCCIÓN
Las Biomoléculas orgánicas son las Biomoléculas que contienen carbón e hidrogeno, dentro de estas tenemos a las naturales, que son las que forman parte de los seres vivos, como lo son las proteínas, carbohidratos y lípidos.Estas biomoléculas poseen estructuras características y las podemos identificar al mezclarlas con reactivos específicos , como por ejemplo: el Lugol, la Ninhidrina y el reactivo de Biuret(sulfato de cobre).
La Ninhidrina es un poderoso agente reactivo común para visualizar las bandas de separación de aminoácidos por cromatografía o electroforesis, también es utilizada con fines cuantitativos para ladeterminación de aminoácidos. Reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una coloración que varía de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado púrpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la coloración producida por la Ninhidrina es independiente de la coloración original del aminoácido.
El reactivo de Biuret está hecho de hidróxidopotásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4O6·4H2O). Detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida.
El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con Poli péptidos de cadena corta.

El Lugol esuna solución de Yodo (1%) y yoduro de Potasio (2%) en agua destilada. Este reactivo reacciona con algunos polisacáridos como los almidones, glucógeno y ciertas dextrinas, formando un complejo de inclusión termolábil que se caracteriza por ser colorido, dando color diferente según las ramificaciones que presente la molécula.
Las Aminoácidos dan positivo a la reacción con Ninhidrina porque tienen aminoslibres; las proteínas y los péptidos que tengan enlace Peptídico dan positivo con el reactivo de Biuret, El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con Poli péptidos de cadena corta; El Lugol da positivo con algunos polisacáridos como los almidones y glucógeno.

La leche contiene proteínas y carbohidratos (Monosacáridos), La Sacarosa esun carbohidrato (Disacárido), el Almidón es un carbohidrato (un polisacárido compuesto de Glucógeno), la Grenetina es una Proteína y la isoleucina es un Aminoácido.

HIPÓTESIS PLANTEADA
Con los reactivos (Ninhidrina, Lugol y reactivo de Biuret) podemos identificar diferentes Biomoléculas. Debido a que la Ninhidrina reacciona con aminoácidos, la isoleucina debe salir positivo con ella y negativocon las muestras que no contengan aminoácidos libres; El Almidón debe dar positivo con Lugol y negativo con los que no sean carbohidratos Polisacáridos, y la leche y grenetina deben dar positivo con la reacción de Biuret porque poseen proteínas y péptidos, por lo tanto las muestras que no tengan proteínas o enlaces Peptídicos no darán positivo con el reactivo de Biuret.



MATERIAL
12tubos de ensaye
Gradilla
Pipetas de 5 mL
Encendedor
Lámparas de alcohol/mechero/velas
Frascos goteros /goteros
REACTIVOS
Lugol
Ninhidrina
CuSO4 (sulfato de cobre)1%
NaOH 10%

MUESTRAS
Peptona 2%
Gelatina 2%
Solución de Almidón
Solución de sacarosa
Solución de Leche
Solución de isoleucina


DESARROLLO
REACCIÓN DE LUGOL
a) Numere 4 tubos de ensaye.
b) Coloque en los tubos 2 mLde: (1) H2O destilada, (2) Almidón, (3) Sacarosa y (4) la muestra problema.
c) Añada a cada tubo una gota de Lugol y mezcle, anote el color que se produce, en su tabla de resultados.
d) Caliente los tubos en Baño María a ebullición, y déjelos enfriar nuevamente observando lo que ocurre con la coloración durante el calentamiento y después de este.
e) Escriba sus resultados en su tabla....