IHC

INMUNOHISTOQUÍMICA

Definición
La inmunohistoquímica (IHC) es una metodología que agrupa diversas técnicas de inmunotinción,
que permiten demostrar antígenos presentes en células o tejidos utilizando anticuerpos
específicos. Esta reacción solo se hace evidente solo si el anticuerpo está marcado con un
fluorocromo (sustancia que absorbe o emite luz y produce una coloración visible).
Para entenderel principio de estas técnicas, se requiere conocer los siguientes conceptos:

Anticuerpos: Es el “reactivo” principal en las técnicas de IHC. Todos los anticuerpos o
inmunoglobulinas comparten algunas características comunes. Cada una se compone de dos
cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L). las cadenas pesadas difieren estructural y
antigénicamente y determinan la clase y subclase de lamolécula. Las cadenas ligeras son
denominadas kappa (k) o lambda (l) y son diferentes en todas las clases y subclases, así como en
diferentes especies. Ver figura 1

Figura1. Representación gráfica sencilla de una molécula de anticuerpo.

Existen cinco clases de anticuerpos llamados isotipos, los cuáles son determinados por su región
constante. Los isotipos son: IgG, IgA, IgM, IgD e IgE; de lascuáles la IgG y la IgM son las más
utilizadas en IHC, de las cuales profundizaremos a continuación:

· IgG: Es la principal inmunoglobulina en sangre, representan más del 70% de las Igs séricas
totales, las diferentes subclases se presentan en diferentes proporciones: la IgG1 es la subclase
más frecuente (más del 60%), seguida de la IgG2 (18%), mientras que la IgG3 se encuentra en
menor proporción.Esta Inmunoglobulina posee capacidad neutralizante, es capaz de unirse al
complemento y de unirse a células NK y a macrófagos y son capaces de atravesar activamente las
membranas biológicas, debido a su pequeña estructura monomérica (Peso Molecular 150KD). La
IgG se sintetiza tardíamente tras un primer contacto con el antígeno, sin embargo, tras un
segundo contacto, la mayoría de las Igs son deesta clase.

IgM: Son las que más rápidamente se forman en respuesta a un estímulo antigénico (Respuesta
Primaria). Esta inmunoglobulina se caracteriza por poseer capacidad neutralizante y activar el
sistema inmune; sin embargo por tener una estructura pentamérica (Peso Molecular 900KD) no
atraviesa activamente las membranas biológicas, condición que esta molécula ejerza su acción en
espaciosintravasculares. Representa del 5-10% de las inmunoglobulinas séricas totales. Ver figura
2

Figura 2. Representación gráfica de la Inmunoglobulina M (IgM) Tomado de Guide Book
Immunohistochemical Protocols by Dako; 2006.

Qué diferencia hay entre anticuerpos policlonales y monoclonales? : Los primeros son producidos
por diferentes células y en consecuencia son diferentes. Estos reaccionan con variosepítopes del
antígeno. El animal que se utiliza con más frecuencia para producir estos anticuerpos es el conejo,
seguido de la cabra, cerdo, oveja, caballo y cobayos. Mientras que los anticuerpos monoclonales

son el producto de un clon individual de célula plasmática, estos son inmunohistoquímicamente
idénticos y reaccionan con epítope específico del antígeno. Los ratones son los animalesutilizados
para su producción. Los anticuerpos monoclonales tienen cierta ventaja sobre los policlonales
debido su alta homogeneidad y la ausencia de anticuerpos no específicos. Ver figura 3

Figura 3. Diferencias entre anticuerpos policlonales y monoclonales. En la figura A se representa
esquemáticamente los diferentes sitios de unión de los anticuerpos policlonales. En el panel B se
esquematiza laespecificidad de los anticuerpos monoclonales. Modificado de Guide Book
Immunohistochemical Protocols by Dako; 2006.

Los anticuerpos de animales híper inmunizados no solo difieren en el reconocimiento de antígenos
multivalentes sino también en su afinidad; término que ha sido usado para describir afinidades
intrínsecas y funcionales.

La afinidad intrínseca de un anticuerpo reside en la región...