imforme actividad enzimatia

PRÁCTICA 6
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS: CATALASA


I. EL PROBLEMA

Reconocer el efecto de la enzima (catalasa), presente en tejidos animales y vegetales.

Comparar la acción de la peroxidasa (catalizador orgánico) y del MnO2 (catalizador inorgánico) sobre el mismo sustrato (agua oxigenada).

Establecer el efecto de la temperatura en la intensidad de lareacción.

Verificar la actividad catalítica de la enzima peroxidasa por medio del desprendimiento de burbujas y la producción de calor.


II. FUNDAMENTO TEÓRICO

Las enzimas son proteínas específicas con excepción de las ribozimas, que actúan como catalizadores de las reacciones bioquímicas en todos los seres vivos. La actividad de estas moléculas tan particulares puede comprobarseexperimentalmente mediante la identificación y cuantificación de los productos formados en las reacciones que ellas regulan. La acción de estas proteínas catalíticas se ve afectada por la variación de factores físicos y químicos tales como la temperatura, la concentración de la enzima y del sustrato, el pH, etc.

El peróxido de hidrógeno es un residuo del metabolismo celular de muchos organismos vivospero debido a su toxicidad debe transformarse rápidamente en compuestos menos peligrosos. Para ello las células utilizan la catalasa que descompone el H2O2 en agua y oxígeno.

2 H2O2 -------------------------> 2H2O + O2
Catalasa o peroxidasa

Esta reacción puede observarse por la formación de burbujas, las cuales se producen debido al desprendimiento de oxígeno. La cantidad de lasmismas es directamente proporcional a la intensidad de la reacción y puede utilizarse como una medida de ella.
En esta práctica de laboratorio se diseñaron experimentos para verificar la actividad de la enzima y por último compararla con un catalizador inorgánico (MnO2)


III. CUESTIONARIO PARA EL PREINFORME

Elabore el preinforme, según lo pre-establecido que contenga los resultados delas siguientes consultas:

1. ¿En qué tipo de organismos se encuentra catalasa, en los aerobios o anaerobios?.
2. ¿La catalasa tiene o no cofactores?, si los tiene mencione cuáles son.
3. ¿La catalasa tiene estructura cuaternaria?
4. ¿Cómo se puede clasificar a la catalasa, de acuerdo con la reacción que cataliza?
5. Haga una descripción sobre el efecto que tiene la temperatura en laactividad de las enzimas.
6. Cómo influye en la actividad catalítica los cambios de pH.
7. Consulte sobre los catalizadores inorgánicos y establezca dos diferencias con respecto a las enzimas
8. ¿Qué otros factores, además de la temperatura y el pH, influyen en la actividad de una enzima?

IV. MATERIALES Y REACTIVOS

Material de prueba:

100g Espinaca 100g Champiñones
100g Hígado de res100g Papa criolla
Opcionalmente leche cruda

Material por grupo de trabajo

Tubos de ensayo 20 Pipetas de 1 ml 2
Gradilla 1 Vasos de precipitados de 250 ml 4
Pipeteador 1 Vasos de precipitados de 100 ml 2
Goteros 2 Cronómetro 1
Pinzas para tubos 1 Placa de calentamiento 1
Pipetas de 5 ml 3 Aro con nuez 1
Probeta de 5 ml 1 Soporte universal1
Termómetro (-10 a 50oC) 1 Plancha de calentamiento
Baño maría a 37 y 80oC
Reactivos

Peróxido de hidrógeno o agua HgCl3, 2% (cloruro mercúrico)
oxigenada al 5% MnO2
HCl, 3M
NaOH, 3M
Buffer de fosfatos 0.02M pH = 7
Agua destilada


V .PROCEDIMIENTO.

Preparación de los homogenados (Para preparar antes de la práctica)

Preparar homogenados, por separado, a partirde fragmentos de papa (50 g), hígado( 50 g), champiñones ( 50 g)y espinaca ( 50 g) en una licuadora con 150 mL de agua destilada, hasta diluir parte de la muestra. (Recomendable hacer los cálculos para la preparación de la cantidad dependiendo del número de grupos de laboratorio).

Colocar cada homogenado en un vaso de precipitado previamente rotulado

Verificación de la actividad de la...