importante
Páginas: 7 (1518 palabras)
Publicado: 14 de noviembre de 2014
14/11/2014
Compacto IV
PCR
Secuenciación de DNA
Terapia génica
Células madres
PCR
Clonación acelular (PCR).
Clonación Celular (ADN recombinante)
Características: Síntesis de DNA dirigida
Amplificación específica de una región del DNA
1
14/11/2014
Componentes de un PCR:
Taq polimerasa. ( Thermophilus aquaticus)
dNTP.
Partidores (primers).
Buffer.
Mg2+
Equipo en elque se hace un PCR: Termociclador
PRINCIPIO DE LA PCR
2
14/11/2014
SINTESIS HEBRA DNA COMPLEMENTARIAS
5’
3’
3’
5’
5’
3’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3
14/11/2014
Separación de fragmentos de DNA por electroforesis
(en poliacrilamida o agarosa)
4
14/11/2014
APLICACIONES DEL PCR
Alimentos
Ganadería
Medicina, trasplantes
Medicina, cancerMedicina, enfermedades hereditarias
Medicina, enfermedades infecciosas
Análisis contaminantes biológicos
Diagnóstico infecciones
Tipificación genética
Diagnóstico infecciones
Tipificación genética
Diagnóstico infecciones
Tipificación genética
Tipificación genetica
Paternidad, crímenes, violaciones
Tipificación HLA
Diasgnóstico precoz, seguimiento
Diagnóstico prenatal
DiagnósticoBiología Molecular,DNA recombinate
Diversas técnicas
Agricultura
Pisicultura
Forestal
Medicina Legal, Forénsica
Secuenciación de DNA
5
14/11/2014
Secuenciación del ADN por
método de Sanger
-Se utiliza DNApolimerasa (T7), desoxinucleótidos
(uno de ellos marcado con S35), un partidor y didesoxinucleótidos.
-Los fragmentos obtenidos se separan en un gel
de poliacrilamida yurea
- El gel se seca y se somete a autorradiografía
- Se pueden leer entre 300-400 bases/secuencia
6
14/11/2014
Secuenciación automática de ADN
Ello se pudo lograr con
la síntesis de un set de
didesoxinucleótidos
marcados con
diferentes compuestos
fluorescentes
7
14/11/2014
Se obtienen entre 500- 1000
bases/ secuenciación
8
14/11/2014
9
14/11/2014Terapia Génica
10
14/11/2014
Terapia Génica
Algunas enfermedades genéticas se pueden tratar mediante terapia génica.
-
Inmunodeficiencia combinada grave
Fibrosis quística
Hemofilia
Distrofia muscular
Cáncer (insertar genes suicidas, o genes que estimulen la respuesta
inmune antitumoral, o bien genes supresores de tumores)
Melanoma
Glioblastoma
Sida
Hay muchos estudios enanimales
posteriormente en humanos
de
experimentación
y
Las pruebas clínicas de todo tratamiento se dividen en fases: desde la fase 1, donde se
recoge la información sobre unas pocas pruebas, pero no significativas
estadísticamente, hasta la fase IV, que recoge las últimas pruebas que confirman la
seguridad de un producto que ya está siendo comercializado. Los procedimientos deterapia génica más avanzados se encuentran en fase II, donde se empiezan a tratar un
número considerable de enfermos (de 300 a 3.000 personas) para estudiar los
resultados con validez estadística. Es el caso de tratamiento de la fibrosis cística, una
de las enfermedades genéticas más frecuente, se haya en fase II de desarrollo.
11
14/11/2014
Terapia génica
Actualmente, el método más comúnde transferencia de genes utiliza el virus
de la leucemia murina de Maloney como vector para transportar los genes a
transferir. Se eliminan los genes gag, pol y env del virus, y se inserta el gen
humano clonado.
La construcción resultante se empaqueta en las proteínas de la cubierta del
virus; el vector retrovírico puede infectar células, pero no puede replicarse
debido a los genes víricosque le faltan. El vector se mezcla con una
suspensión de células diana, y entra en la célula por medio de un receptor de
la superficie celular. Una vez en el citoplasma, el genoma vírico que
transporta el gen humano clonado se integra en uno de los cromosomas de la
célula diana.
Actualmente se están tratando varias enfermedades hereditarias
con terapia génica, como la inmunodeficiencia...
Compacto IV
PCR
Secuenciación de DNA
Terapia génica
Células madres
PCR
Clonación acelular (PCR).
Clonación Celular (ADN recombinante)
Características: Síntesis de DNA dirigida
Amplificación específica de una región del DNA
1
14/11/2014
Componentes de un PCR:
Taq polimerasa. ( Thermophilus aquaticus)
dNTP.
Partidores (primers).
Buffer.
Mg2+
Equipo en elque se hace un PCR: Termociclador
PRINCIPIO DE LA PCR
2
14/11/2014
SINTESIS HEBRA DNA COMPLEMENTARIAS
5’
3’
3’
5’
5’
3’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
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Separación de fragmentos de DNA por electroforesis
(en poliacrilamida o agarosa)
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14/11/2014
APLICACIONES DEL PCR
Alimentos
Ganadería
Medicina, trasplantes
Medicina, cancerMedicina, enfermedades hereditarias
Medicina, enfermedades infecciosas
Análisis contaminantes biológicos
Diagnóstico infecciones
Tipificación genética
Diagnóstico infecciones
Tipificación genética
Diagnóstico infecciones
Tipificación genética
Tipificación genetica
Paternidad, crímenes, violaciones
Tipificación HLA
Diasgnóstico precoz, seguimiento
Diagnóstico prenatal
DiagnósticoBiología Molecular,DNA recombinate
Diversas técnicas
Agricultura
Pisicultura
Forestal
Medicina Legal, Forénsica
Secuenciación de DNA
5
14/11/2014
Secuenciación del ADN por
método de Sanger
-Se utiliza DNApolimerasa (T7), desoxinucleótidos
(uno de ellos marcado con S35), un partidor y didesoxinucleótidos.
-Los fragmentos obtenidos se separan en un gel
de poliacrilamida yurea
- El gel se seca y se somete a autorradiografía
- Se pueden leer entre 300-400 bases/secuencia
6
14/11/2014
Secuenciación automática de ADN
Ello se pudo lograr con
la síntesis de un set de
didesoxinucleótidos
marcados con
diferentes compuestos
fluorescentes
7
14/11/2014
Se obtienen entre 500- 1000
bases/ secuenciación
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14/11/2014
9
14/11/2014Terapia Génica
10
14/11/2014
Terapia Génica
Algunas enfermedades genéticas se pueden tratar mediante terapia génica.
-
Inmunodeficiencia combinada grave
Fibrosis quística
Hemofilia
Distrofia muscular
Cáncer (insertar genes suicidas, o genes que estimulen la respuesta
inmune antitumoral, o bien genes supresores de tumores)
Melanoma
Glioblastoma
Sida
Hay muchos estudios enanimales
posteriormente en humanos
de
experimentación
y
Las pruebas clínicas de todo tratamiento se dividen en fases: desde la fase 1, donde se
recoge la información sobre unas pocas pruebas, pero no significativas
estadísticamente, hasta la fase IV, que recoge las últimas pruebas que confirman la
seguridad de un producto que ya está siendo comercializado. Los procedimientos deterapia génica más avanzados se encuentran en fase II, donde se empiezan a tratar un
número considerable de enfermos (de 300 a 3.000 personas) para estudiar los
resultados con validez estadística. Es el caso de tratamiento de la fibrosis cística, una
de las enfermedades genéticas más frecuente, se haya en fase II de desarrollo.
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14/11/2014
Terapia génica
Actualmente, el método más comúnde transferencia de genes utiliza el virus
de la leucemia murina de Maloney como vector para transportar los genes a
transferir. Se eliminan los genes gag, pol y env del virus, y se inserta el gen
humano clonado.
La construcción resultante se empaqueta en las proteínas de la cubierta del
virus; el vector retrovírico puede infectar células, pero no puede replicarse
debido a los genes víricosque le faltan. El vector se mezcla con una
suspensión de células diana, y entra en la célula por medio de un receptor de
la superficie celular. Una vez en el citoplasma, el genoma vírico que
transporta el gen humano clonado se integra en uno de los cromosomas de la
célula diana.
Actualmente se están tratando varias enfermedades hereditarias
con terapia génica, como la inmunodeficiencia...
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