Imvic

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1º práctica pruebas bioquímicas IMViC
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Microbiología
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PRUEBAS IMViC

Consta de cuatro pruebas de identificación bioquímica su nombre proviene de I; prueba del Indol, M; prueba del rojo demetilo, V; Voges Proskauer, C; prueba del citrato.

Son cuatro pruebas bioquímicas. Se emplean fundamentalmente para la identificación de las Enterobacterias (bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos con metabolismo fermentador). Dependiendo de las condiciones, las enterobacterias, pueden realizar un metabolismo aerobio (si disponen de oxígeno), realizar una respiración anaerobia (si haynitratos u otro aceptor de electrones) y distintas fermentaciones.

PRUEBA DEL INDOL
Fundamento
El Indol es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido triptófano. Las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de degradar el triptófano con producción de Indol, escatol, alanina yacido indolacético. La producción de Indol es una característica importante para laidentificación de muchas especies de microorganismos. La prueba de Indol está basada en la formación de un complejo rojo cuando el Indol reacciona con el grupo aldehído del p-dimetilaminobenzaldehído. Este es el principio activo de los reactivos de Kovacs y Ehrlich. El medio de cultivo utilizado debe ser rico en triptófano.
Se determina si la bacteria posee una enzima (triptofanasa). La triptofanasahidroliza el triptófano  en  Indol y alanina. El Indol se detecta empleando un reactivo específico (Reactivo de Kovacs). El triptófano forma parte de las peptonas del medio.

Material
* Tubo de cultivo.
* Algodón graso
* Asa de siembra
* Mechero bunsen
* Estufa de cultivo mantener durante 24h
Reactivos
* Agua de peptona
* Reactivo Indol de Kovacs
* Reactivo deEhrlich
* Éter etílico
* Microorganismo
Procedimiento
Método de Kovacs.
En el tubo con agua de peptona se siembra el microorganismo problema (Citrobacter freundii & Salmonella). El medio de cultivo es el de agua de peptona, pues este medio tiene triptófano. El medio no debe tener glucosa, pues la fermentación de la glucosa eleva la acidez del medio y puede inhibirse latriptofanasa, ya que el enzima troptofanasa, actúa a un PH óptimo de 7,4-7,8.
Incubar a 37ºC durante 24-48 horas.
Añadir al cultivo 5 gotas de reactivo Indol de Kovacs. El reactivo Indol de Kovacs debe ser fresco, pues con el tiempo cambia el color de amarillo a castaño y pierde sensibilidad. Puede conservarse en la nevera a 4-10ºC algunos días, debe conservarse en frasco color topacio con cierre hermético.Agitar suavemente el tubo y dejarlo unos minutos en reposo.
La interpretación de los resultados.
* Indol positivo: aparece un anillo color rojo en la superficie del medio
* Indol negativo: el medio toma el color del reactivo añadido en su superficie.
Prueba Indol | Resultados |
Citrobacter freundii | Anillo amarillo prueba negativa |
Salmonella | Anillo amarillo prueba negativa|

Prueba de rojo de metilo
Fundamento
Detecta la fermentación ácido-mixta. Se acumulan ácidos (acético, fórmico, etc.), relativamente fuertes y bajan el pH del medio hasta 4-5. Dicho cambio de pH se detecta añadiendo un indicador (rojo de metilo) al cultivo.
Una de las características taxonómicas que se utilizan para identificar los diferentes géneros de enterobacterias lo constituyen eltipo y la proporción de productos de fermentación que se originan por la fermentación de la glucosa. Se conocen 2 tipos generales: La fermentación ácido-mixta y la fermentación del 2,3 butanodiol. En la fermentación ácido mixta se forman fundamentalmente láctico, acético y succínico, además de etanol, H2 y CO2. En la vía del butanodiol se forman cantidades menores de ácido (acetato y succinato) y...