inclusion

C) INCLUSION.
Se trata de conseguir que el agua de los tejidos sea sustituida por un tipo especial de cera. La parafina no es soluble en agua, por lo que primero hay que deshidratar el tejido bañándolo en concentraciones crecientes de etanol (desde 50º hasta absoluto). Una vez sustituida el agua por etanol absoluto debe sustituirse el etanol por xilol, disolvente en el que es soluble laparafina. Después de tener embebido el tejido en xilol, puede sustituirse éste por parafina caliente (60º), que se solidifica a temperatura ambiente.
Los tejidos fijados adquieren cierta consistencia y dureza, pero no la suficiente para que, de ellos, se obtengan secciones delgadas. Estas secciones, del orden de algunas milésimas de milímetro (5 a 10 m), se conseguirán cuando los tejidos se infiltrencon sustancias denominadas “de inclusión” y adquieran tal dureza que sometidos al filo de una navaja produzcan secciones, cortes o láminas sumamente delgados y transparentes.
Las sustancias de inclusión tienen la propiedad de incorporarse e infiltrarse al interior de las células y tejidos con la finalidad de servirles de soporte. Así los tejidos y la sustancia de inclusión forman un bloquehomogéneo en dureza y consistencia, a pesar que sus componentes tuvieron originalmente distinta dureza.
Existen una serie de sustancias de inclusión que se han empleado o se utilizan actualmente. Unas son solubles en agua (gelatina, carbowax, glicol metacrilato) otras, solubles en solventes orgánicos (parafina, celoidina, resinas epóxicas).
Cualquiera que sea el medio de inclusión a emplear escondición indispensable que la muestra a incluir se encuentre embebida en la sustancia que disuelve al medio de inclusión
Inclusión en parafina. Después de la fijación y el “lavado” de las muestras, éstas se encuentran embebidas en agua o en alcohol, por lo que resulta imposible que se infiltren con parafina, medio de inclusión insoluble en agua y alcohol. Por lo tanto, para que los tejidos puedanser incluidos en parafina se requiere deshidratarlos e infiltrarlos con el solvente de la sustancia de inclusión.
Los pasos a seguir para la inclusión de las muestras en parafina son:
a) Deshidratación. Significa extraer o remover el agua de los tejidos fijados. La deshidratación debe ser completa porque, de lo contrario, el solvente no actúa de forma adecuada y el bloque de inclusión no alcanzala dureza requerida. Para tal fin se utilizan líquidos deshidratadores en los cuales se sumergen los tejidos. Los deshidratadores más usados son el alcohol etílico, el alcohol isopropílico, el dioxano y el cloroformo.En el caso de la inclusión en parafina, las muestras se deshidratan en baños sucesivos en soluciones de concentración crecientes de alcohol etílico. El procedimiento de rutina es elsiguiente:
1) alcohol etílico al 70 % ------------------- 12 horas
2) alcohol etílico al 70 % ------------------- 12 horas
3) alcohol etílico al 95 % --------------------- 1 hora
4) alcohol etílico al 95 % --------------------- 1 hora
5) alcohol etílico al 100 % (absoluto) --------1 hora
6) alcohol etílico al 100 % (absoluto)---------1 a 1.5 horas.
Nota: En cada caso es necesarioagitar de vez en cuando los frascos que contienen las muestras
Los tiempos indicados son los que se aplicarán a las muestras de tamaño mediano (1 cm2
x 0.5 cm. de grosor). Los tiempos pueden disminuirse o incrementarse si las piezas son más pequeñas o más grandes.
La deshidratación incompleta de los tejidos se comprueba cuando éstos al sumergirse en el líquido diafanizador muestran un aspectoturbio blanquecino
b) Diafanización. Las muestras deshidratadas se encuentran totalmente embebidas en alcohol etílico absoluto; pero la parafina tampoco es soluble en alcohol por lo que es necesario reemplazarlo por sustancias que sean capaces, simultáneamente, de mezclarse con el alcohol y disolver la parafina. Estas se denominan líquidos diafanizadores o intermediarios.
Ejemplos: xilol,...