INDUCCION DE UNA PROTEINA RECOMBINANTE.




INDUCCION DE UNA PROTEINA RECOMBINANTE

BIOTECNOLOGIA

16/08/2014

INDUCCION DE UNA PROTEINA RECOMBINANTE.
INTRODUCCION.
La producción de proteínas para diversas aplicaciones ha ido enaumento, pasando de la escala experimental hasta la industrial, en algunos casos. Para ello se han estudiado y desarrollado diversos sistemas de expresión. De todos estos, los sistemas de expresiónbacterianos son los más atractivos debido a su rápido crecimiento con alta densidad en sustratos de bajo costo, genomas ampliamente caracterizados y un creciente número de vectores y cepas hospederasmutantes (Terpe 2006).
E. coli y sistema de expresión T7
El sistema bacteriano más utilizado es el que emplea a Escherichia coli, en especial E. coli BL21 la cual es usada principalmente para laproducción de proteínas dado que es una cepa ampliamente estudiada, además posee algunas características en su genotipo que la hacen idónea para dicho propósito, dentro de las que destacan lassiguientes:
 lon: deficiente en esta proteasa que degrada las proteínas heterólogas
 ompT negativa degrada proteínas extracelulares
 F- incapaz de generar una sola hebra de DNA
 gal: deficiente enel metabolismo de galactosa
 dcm: deficiente en metilación de citocinas
 Posee un gen de RNA pol T7
Con las propiedades antes mencionadas y aprovechando la expresión de la RNA pol T7 se puedeemplear en conjunto con esta cepa un vector que posea un promotor del mismo bacteriófago (T7), por lo cual el sistema de vectores pET son la opción adecuada para introducir transgenes de interés.PROCEDIMIENTO.

Hicimos veinte cajas para diez equipos , dos tipos de selección: kanamicina y ampicilina 10ml por caja de una solución de 150ml 100mg/l para ampicilina y 150ml 50mg/l de kanamicinarespectivamente diez de ampicilina y diez de kanamicina, partiendo de una solución stock de 100mg/ml de ampicilina y 50mg/ml, tomando 150µl para llevarlas a un litro.
Para la preparación de los medios...