INDUCCIÓN DE LINFOCITOS ESPLENICOS CON LPS

Evaluación de producción de IFNγ e IL-4 ante inducción con LPS sobre celulas linfoides de bazo usando ELISA
Sandwich


Primera parte: ¿Cuál es la acción del LPS sobre las células linfoides?
Los polisacáridos (LPS) o endotoxinas son glicolípidos que constituyen la mayor parte de la
membrana externa de las bacterias gram negativas. Actúa como un potente activador de las
células delsistema inmune, por lo que representa un patrón molecular asociado a patógeno o
PAMP. LPS es una toxina extremadamente potente ya que puede activar macrófagos a
concentraciones menores a 1 pg/mL [1].
La estructura del LPS consiste en tres regiones principales, (1) La región polisacárido O que
está unida a (2) el núcleo del polisacárido y que a su vez está unida a (3) lípido A por un
trisacárido deácido 2 - ceto - 3 desoxiocatanoico [2], este último es conservado en todas las
bacterias gram negativas y es responsable de la toxicidad biológica del LPS.
Un aparente prerrequisito para que proteínas o péptidos neutralicen el LPS es que sean
capaces de cambiar la estructura de los agregados del lípido A. Esto se debe a que la
activación celular por acción de la endotoxina se inicia por suinteracción con la proteína LBP,
presente en la sangre o liquido extracelular, formando un complejo que sirve para facilitar el
transporte de LPS a la superficie de la célula que va a responder (Linfocitos B, macrófagos,
monocitos, células dendríticas). Una proteína extracelular llamada MD2 (Proteína de
diferenciación mieloide 2) se une al componente lipídico A formando un complejo queinteractúa después con TLR4 e inicia la señalización. Otra proteína llamada CD14 es
necesaria para la producción de señales a partir de LPS. La mayoría de las células expresan
CD14 (excepto las endoteliales) en forma soluble o de membrana, de esta forma, se inicia la
activación celular con la subsiguiente liberación de citoquinas proinflamatorias (IL-1, IL-6 y
TNF-a), quimioquinas (CCL2 y CXCL8),moléculas coestimuladoras (CD80 y CD86) [3].
Además, en linfocitos B el LPS actúa como un mitógeno y como coadyuvante para la formación
de anticuerpos, esta capacidad es atribuida a la región de Lípido A de la molécula de LPS [2].
Segunda Parte: Resultados
Las absorbancias obtenidas al restar los blancos e interpolar en las curvas de calibrado respectivas,
las concentraciones de las muestrasen consecuencia resultan ser negativas al igual que los
70.
controles. Lo anterior sugiere la nula detección de IL-4 o IFNγ por el método de ELISA
sándwich, lo que se explica mediante la respuesta innata generada por inducción con LPS, en
donde se genera una fuerte estimulación de células presentadoras de antígeno (APC) como los
macrófagos, linfocitos B y células dendríticas, induciendo quese liberen citoquinas como IFN
de tipo I y citoquinas proinflamatorias como TNFα, IL-1 e IL-6 [3], fundamentales en la
respuesta inflamatoria aguda, por lo que se debe evaluar este tipo de citoquinas, para indicar
los efectos del LPS.
La IL-4 es producida por mastocitos o por el mismo T helper no diferenciado, para inducir su
diferenciación a TH2, por lo que representa una respuestaadaptativa y no innata, lo mismo
para el IFNγ que promueve la diferenciación de T helper a TH1 [3]. De acuerdo a lo anterior, la
estimulación con LPS requiere mayor tiempo para que la presentación de antígenos ocurra
y así desarrollar una respuesta celular adaptativa, ya que según los resultados no hay

producción de citoquinas que estimulen la diferenciación de linfocitos T helper a TH1 o
TH2 enlas células linfoides del bazo.
Además se propone la evaluación de la producción de anticuerpos como IgG, debido a la
posible acción como coadyuvante del LPS sobre linfocitos B.
Tercera parte: ELISA Sándwich

1. Con qué fin se realiza una curva de calibrado y que consideraciones se debe tener
Una curva de calibración se realiza para que posteriormente al revelado, poder realizar la...