Info Enzimas 8 10

“UTILIZACIÓN DE ENZIMAS EN ANÁLISIS”

Núñez Edison, Tirado Marcelo,

Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas, Facultad de Ciencia e Ingeniería en Alimentos, Universidad Técnica de Ambato.


Resumen
En el presente ensayo de la utilización de enzimas en análisis se estableció el porcentaje de pureza de los almidones de yuca y papa extraídos mediante la cuantificación enzimática de la glucosaformada luego de la hidrólisis con -amilasa y glucoamilasa para lo cual se cuantificó el rendimiento del almidón al determinar los porcentajes de humedad de la materia prima y producto terminado, el proceso de cuantificación del contenido de almidón enzimáticamente conllevó el pesar 50 mg de cada almidón en dos tubos de boca ancha, colocar un magneto pequeño en el interior del tubo y agitarsuavemente para que el almidón no se adhiera a las paredes añadiendo 40 L de glucoamilasa comercial y tomando las alícuotas para determinaran el contenido de glucosa a través del kit y registrando las absorbancias y dilución usada. A partir de los datos de los pesos de materia prima original, de la fracción comestible y de almidón seco, se calculó el rendimiento de almidón en base comercial y en baseseca, frente al peso total de la yuca y en relación a la fracción comestible, además se determinó el contenido de almidón a partir de las absorbancias de las muestras y la curva estándar de glucosa para DNS y GLOX-Peroxidasa.
Palabras clave: DNS, GLOX-Peroxidasa.

Introducción
La glucoamilasa es una enzima hidrolítica del grupo de las amilasas, también conocida como amiloglucosidasa, su nombresistemático es 1,4-alfa-D-glucano glucohidrolasa (EC 3.2.1.3). Es una de las enzimas más estudiadas debido a su influencia directa en la degradación del almidón, uno de los productos alimentarios más explotados a nivel mundial. Su actividad es máxima entre pH 4 - 5,5 y temperatura alrededor de 55ºC - 65ºC, es producida extracelularmente por numerosos tipos de hongos y algunas bacterias, aunque laprincipal fuente de esta enzima son los hongos filamentosos donde destaca el género Aspergillus. (Navarro, D. 2009)
La a-amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la saliva humana y cataliza la degradación del almidón, que es un polisacárido de reserva vegetal. El almidón está formado por dos tipos de moléculas: la amilosa y la amilopectina, ambos polisacáridos de glucosa. La amilosa se conformapor cadenas lineal es de glucosas unidas por enlaces a- C1- C4, mientras que la amilopectina tiene, además de estos últimos enlaces, uniones C1 con C6, formando cadenas ramificadas. La a-amilasa rompe uniones C1- C4, tanto en la amilasa como en la amilopectina, dejando dextrinas lineales y ramificadas ( oligosacáridos) como productos. (Palacios, A. 2010)
Las enzimas se emplean en muchos análisiscomo reactivos estándar en los laboratorios para el diagnóstico de enfermedades, para el control y el seguimiento de enfermedades y de la respuesta del paciente hacia la terapia seguida, y para la identificación y control de la concentración de drogas o sus metabolitos en la sangre u otros fluidos corporales. Las técnicas de inmunoanálisis enzimático (ELISA) representan un nuevo e importanteavance al asociar anticuerpos específicos a enzimas como la peroxidasa o la galactosidasa cuya unión genera una reacción colorimétrica (se observa color) proporcional a la extensión de unión del anticuerpo.
(PQBIO. (2009).
En dicho ensayo se estableció el porcentaje de pureza de los almidones extraídos mediante la cuantificación enzimática de la glucosa formada luego de la hidrólisis con -amilasa yglucoamilasa.

Material y Métodos.

Preparación del tampón acetato de sodio 0,1 M de pH 4,5 (150 ml):
Se preparó las soluciones de ácido acético y acetato de sodio 0,1M. Se mezcló las soluciones hasta conseguir que el pH de la mezcla sea de 4,5 (Sugerencia: mezclar inicialmente las dos soluciones en relación 50:50).
Solución tampón de fosfato de sodio 0,1 M de pH 6,5 (50 ml)
Se pesó por...