Informacion complementaria para yersinia enterocolitica
Páginas: 6 (1404 palabras)
Publicado: 3 de julio de 2011
Y. enterocolitica DESDE ALIMENTOS
A) MEDIOS DE CULTIVO
PREENRIQUECIMIENTO O ENRIQUECIMIENTO NO SELECTIVO (relación muestra:medio 1/10)
* Buffer fosfatos salino (PBS 0.067 M), 4° C, 21 días.
En g/l: Na2HPO4 20.55, KH2PO4 1.2 y NaCl 8.5 se disolvieron en agua
destilada (A.D.), pH 7.6 ajustado con HCl o NaOH.
* PBS adicionado con sorbitol y sales biliares (PSB), 25° C, 1-3 días.Idem PBS más sorbitol 1% y sales biliares 0.15%, pH 7.6
* Caldo tripticase soja (TSC), 25° C, 18 h.
En g/l: tripticase 17, peptona de soja 3, NaCl 5, K2HPO4 3.25,
dextrosa 2.5, A.D., pH 7.6
* Caldo extracto de levadura-rosa de bengala (YER), 4° C, 9 días.
En g/l: Na2HPO4.7 H2O 17.25, extracto de levadura 5,
sales biliares 2, NaCl 1, MgSO4. 7 H2O 0.01 en 770 mlA.D. Ajustar pH a 7.9. Autoclavar a 121°C 15 min. Agregar en frío las siguientes soluciones esterilizadas por filtración: sorbosa 100 ml al 4%, ácido pirúvico (sal de sodio) 100 ml al 1%, y rosa de bengala 10 ml x 4 mg/ml, pH final 7.9.
ENRIQUECIMIENTO SELECTIVO (inocular en relación 1/100)
*Caldo modificado de Rappaport (CMR), 22° C, 4 días.
En g/l: peptona de caseína 10, extracto delevadura 1,
Na2HPO4 2, verde de malaquita 0.013. Aditivos: MgCl2 80, carbenicilina 0.0025, pH 5.8.
*Caldo Irgasan-ticarcilina-carbenicilina (ITC), 25° C, 2 días.
En g/l: triptona 10, extracto de levadura 1, MgCl2 80,
NaCl 5, verde de malaquita 0.01, clorato de potasio 1,
ticarcilina 0.001, Irgasan DP 300 (2, 4, 4’ –tricloro- 2’ –
hidroxidifeniléter) 0.001, pH 6.9.*Caldo bilis-oxalato-sorbosa (BOS), 22° C, 5 días.
En g/l: Na2HPO4.7 H2O 17.25, oxalato de sodio 5, sales biliares 2, NaCl 1, MgSO4.7H2O 0.01. Las siguientes soluciones esterilizadas por filtración fueron adicionadas: sorbosa 100 ml al 4%, asparagina 100 ml al 1%, metionina 100 ml al 10%, amarillo de metanilo 10 ml x 2.5 mg/ml, extracto de levadura 10 ml x 2.5 mg/ml y ácidopirúvico (sal de sodio) 10 ml al 0.5%, Irgasan DP300 1 ml al 0.4% en etanol y furadantina de sodio 10 ml x 1 mg/ml, pH final 7.6.
POST-ENRIQUECIMIENTO (1 parte de caldo de enriquecimiento:9 partes de solución KOH)
* KOH al 0.5% en solución 0.5% NaCl, temperatura ambiente, 20 s.
AISLAMIENTO
* Agar Mac Conkey (MC), 22° a 25°C, 48 h.
En g/l: peptona de caseína 17, peptona de carne 3,NaCl 5,
lactosa 10, sales biliares 1.5, rojo neutro 0.03, cristal
violeta 0.001, agar 13.5.
* Agar Cefsulodin Irgasan Novobiocina (CIN), 37°C, 24 h.
En g/l: peptona de carne 10, peptona de caseína 10,
extracto de levadura 1, manitol 20, piruvato de sodio 2,
NaCl 1, MgSO4 0.01, sales biliares 1, rojo neutro 0.3, cristal violeta 0.001, agar 12.5. Suplementos: cefsulodin 15mg, Irgasan 4 mg, novobiocina 2.5 mg, pH 7.4.
* Agar SSDC
Agar Salmonella Shigella adicionado con (g/l): extracto de levadura 5, desoxicolato de sodio 10, CaCl2 1, pH 7.2.
B) ENSAYO DE PROPIEDADES ASOCIADAS A VIRULENCIA
1. Autoglutinación
Cepas aisladas en agar tripticase soja (TSA) que desarrollaron a 25°C durante una noche, fueron transferidas a TSC e incubadas a25°C durante 12 a 24 h. Dos gotas de cada cepa se transfirieron a cada uno de 2 tubos de ensayo conteniendo 2 ml de i) caldo RM-VP también conocido como medio de Clark y Lubs (Merck, composición: peptona 5,0 g, glucosa 5,0 g, K2HPO4 5,0 g, agua destilada.1000 ml), ó, ii) caldo Eagle compuesto por proteosa peptona 1%, triptona 1%, extracto de levadura 0.5% y adicionado de 10% de suero fetal bovino.El primer medio es provisto en fórmula completa deshidratada por el fabricante y produce resultados confiables.
Un tubo fue incubado a 25°C y el otro a 37°C durante 24 h. Los resultados para cada cepa se analizan e interpretan observando simultáneamente ambos tubos. Las cepas con franca aglutinación a 37°C y débil o nula a 25°C fueron consideradas positivas (presencia del plásmido pYV), en...
A) MEDIOS DE CULTIVO
PREENRIQUECIMIENTO O ENRIQUECIMIENTO NO SELECTIVO (relación muestra:medio 1/10)
* Buffer fosfatos salino (PBS 0.067 M), 4° C, 21 días.
En g/l: Na2HPO4 20.55, KH2PO4 1.2 y NaCl 8.5 se disolvieron en agua
destilada (A.D.), pH 7.6 ajustado con HCl o NaOH.
* PBS adicionado con sorbitol y sales biliares (PSB), 25° C, 1-3 días.Idem PBS más sorbitol 1% y sales biliares 0.15%, pH 7.6
* Caldo tripticase soja (TSC), 25° C, 18 h.
En g/l: tripticase 17, peptona de soja 3, NaCl 5, K2HPO4 3.25,
dextrosa 2.5, A.D., pH 7.6
* Caldo extracto de levadura-rosa de bengala (YER), 4° C, 9 días.
En g/l: Na2HPO4.7 H2O 17.25, extracto de levadura 5,
sales biliares 2, NaCl 1, MgSO4. 7 H2O 0.01 en 770 mlA.D. Ajustar pH a 7.9. Autoclavar a 121°C 15 min. Agregar en frío las siguientes soluciones esterilizadas por filtración: sorbosa 100 ml al 4%, ácido pirúvico (sal de sodio) 100 ml al 1%, y rosa de bengala 10 ml x 4 mg/ml, pH final 7.9.
ENRIQUECIMIENTO SELECTIVO (inocular en relación 1/100)
*Caldo modificado de Rappaport (CMR), 22° C, 4 días.
En g/l: peptona de caseína 10, extracto delevadura 1,
Na2HPO4 2, verde de malaquita 0.013. Aditivos: MgCl2 80, carbenicilina 0.0025, pH 5.8.
*Caldo Irgasan-ticarcilina-carbenicilina (ITC), 25° C, 2 días.
En g/l: triptona 10, extracto de levadura 1, MgCl2 80,
NaCl 5, verde de malaquita 0.01, clorato de potasio 1,
ticarcilina 0.001, Irgasan DP 300 (2, 4, 4’ –tricloro- 2’ –
hidroxidifeniléter) 0.001, pH 6.9.*Caldo bilis-oxalato-sorbosa (BOS), 22° C, 5 días.
En g/l: Na2HPO4.7 H2O 17.25, oxalato de sodio 5, sales biliares 2, NaCl 1, MgSO4.7H2O 0.01. Las siguientes soluciones esterilizadas por filtración fueron adicionadas: sorbosa 100 ml al 4%, asparagina 100 ml al 1%, metionina 100 ml al 10%, amarillo de metanilo 10 ml x 2.5 mg/ml, extracto de levadura 10 ml x 2.5 mg/ml y ácidopirúvico (sal de sodio) 10 ml al 0.5%, Irgasan DP300 1 ml al 0.4% en etanol y furadantina de sodio 10 ml x 1 mg/ml, pH final 7.6.
POST-ENRIQUECIMIENTO (1 parte de caldo de enriquecimiento:9 partes de solución KOH)
* KOH al 0.5% en solución 0.5% NaCl, temperatura ambiente, 20 s.
AISLAMIENTO
* Agar Mac Conkey (MC), 22° a 25°C, 48 h.
En g/l: peptona de caseína 17, peptona de carne 3,NaCl 5,
lactosa 10, sales biliares 1.5, rojo neutro 0.03, cristal
violeta 0.001, agar 13.5.
* Agar Cefsulodin Irgasan Novobiocina (CIN), 37°C, 24 h.
En g/l: peptona de carne 10, peptona de caseína 10,
extracto de levadura 1, manitol 20, piruvato de sodio 2,
NaCl 1, MgSO4 0.01, sales biliares 1, rojo neutro 0.3, cristal violeta 0.001, agar 12.5. Suplementos: cefsulodin 15mg, Irgasan 4 mg, novobiocina 2.5 mg, pH 7.4.
* Agar SSDC
Agar Salmonella Shigella adicionado con (g/l): extracto de levadura 5, desoxicolato de sodio 10, CaCl2 1, pH 7.2.
B) ENSAYO DE PROPIEDADES ASOCIADAS A VIRULENCIA
1. Autoglutinación
Cepas aisladas en agar tripticase soja (TSA) que desarrollaron a 25°C durante una noche, fueron transferidas a TSC e incubadas a25°C durante 12 a 24 h. Dos gotas de cada cepa se transfirieron a cada uno de 2 tubos de ensayo conteniendo 2 ml de i) caldo RM-VP también conocido como medio de Clark y Lubs (Merck, composición: peptona 5,0 g, glucosa 5,0 g, K2HPO4 5,0 g, agua destilada.1000 ml), ó, ii) caldo Eagle compuesto por proteosa peptona 1%, triptona 1%, extracto de levadura 0.5% y adicionado de 10% de suero fetal bovino.El primer medio es provisto en fórmula completa deshidratada por el fabricante y produce resultados confiables.
Un tubo fue incubado a 25°C y el otro a 37°C durante 24 h. Los resultados para cada cepa se analizan e interpretan observando simultáneamente ambos tubos. Las cepas con franca aglutinación a 37°C y débil o nula a 25°C fueron consideradas positivas (presencia del plásmido pYV), en...
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