Informe 1 Molecular Extraccion


EXTRACCIÓN, CUANTIFICACIÓN Y VERIFICACIÓN DE PUREZA DE ÁCIDOS NUCLEICOS (ARN, ADNc Y ADNp) DE Bacillus thuringensis Y Micrococcus luteus, DE HÍGADO DE POLLO (Gallus domesticus) Y DE VACA (Bos Taurus)
Daniela Ardila Morales1, María C. Morales-Pulido2
1 Facultad de Ciencias Naturales e Ingeniería, programa de Biología Marina, Universidad de Bogotá Jorge Tadeo Lozano, sede Bogotá. Bogotá D.C.
2Facultad de Ciencias Naturales e Ingeniería, programa de Biología Ambiental, Universidad de Bogotá Jorge Tadeo Lozano, sede Bogotá. Bogotá D.C.
1 daniela.ardilam@utadeo.edu.co 2 mariac.moralesp@utadeo.edu.co

RESUMEN
Se realizaron extracciones de ADN eucarionte y procarionte provenientes de tejido de hígado de pollo (Gallus domesticus) y de res (Bos Taurus) y colonias de la bacterias Bacillusthuringensis y Micrococcus luteus, mediante lisis, desproteinización y purificación. Se logró la obtención de muestras de ADN que fueron analizadas mediante dos métodos: en gel de agarosa (posterior visualización UV) y Nanodrop® del cual se obtuvo la pureza (260/280) la cantidad de ADNc, ADNp y ARNa. La cantidad promedio de ácidos nucleicos obtenida fue de 466.801 para el plasmídico, 19.1992 para elcromosómico, 4387.124 para el de hígado de pollo y 3845.9375 para el de res. La pureza promedio obtenida fue de 1.6737, 1.7218, 1.4581 y 1.5918 respectivamente. A pesar de estos resultados, los resultados de la electroforesis demuestran muy pocas cantidades de ADN y una mayor contaminación por ARN y otros compuestos.
Palabras clave: Electroforesis, Nanodrop, ADN plasmídico, ADN cromosómico, ADNeucariota, ADN procariota.
INTRODUCCIÓN
El genoma eucariota está compuesto por complejos ADN/proteína conocidos como cromosomas (Campbell & Peters, 2006). Estos tienen dos funciones principales: asegurarse de que el ADN se segregue de forma equitativa en las dos células hijas en la división celular y que la integridad del genoma se mantenga y sea replicada en cada ciclo celular (Bickmore, 2001).
Sinembargo, el tamaño del ADN eucariota varía de especie a especie (Campbell & Peters, 2006). Para este estudio se analizaron muestras de hígado de pollo (Gallus domesticus) y res (Bos taurus). La primera especie se trata de un organismo modelo en la embriología, la biología del desarrollo y el estudio de virus y cáncer (Arcamone et al., 2014). Tiene un tamaño de 1046.93Mb (41.93%G+C) organizado en38 autosomas y 2 cromosomas sexuales (International Chicken Genome Sequencing Consortium, 2004).
La segunda especie, B. Taurus es un organismo modelo en investigación sobre obesidad, salud femenina y enfermedades infecciosas (Cho, Kang, Seong, Park, & Kang, 2015; Kim et al., 2014; Lopez et al., 2015). Posee un genoma de aproximadamente 3000Mb (42.09% G+C) que se encuentra repartido en 29 autosomasy 2 cromosomas sexuales (Jann et al., 2006).
A diferencia de las células eucariotas, el ADN de las procariotas no se encuentra rodeado por una membrana nuclear. El cromosoma bacteriano es una molécula de ADN cerrada y compacta, que por lo general adopta una disposición redondeada y está unido a la membrana citoplasmática (de la Rosa Fraile, Prieto, Marí, & de la Rosa Fraile, 2011). Las bacteriasposeen moléculas circulares de ADN extra cromosómicas llamadas plásmidos, estos portan genes no esenciales y se replican independientemente del cromosoma bacteriano. Por lo tanto, la información que contienen no es vital para la bacteria pero su presencia representa ventajas para la bacteria a presentársele condiciones adversas (Fernández-De-Alba, Berrow, Garcia-Castellanos, García, & Pons,2013).
El tamaño de ADN de esta células también varía según la especie, para esta práctica se trabajó con el de Bacillus thuringiensis y con el de Micrococcus luteus. La primera se trata de una bacteria gram-positiva, formadora de esperas y utilizada como control microbiológico de insectos. El cromosoma circular de esta mide 5292,526 bp (35.43%G+C) de largo y contiene 5382 genes de los cuales 148...