Informe 3 1
Páginas: 6 (1414 palabras)
Publicado: 7 de junio de 2015
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
INFORME N°3
TÍTULO : “Tinción diferencial Acido-Resistente”
PROFESOR : Juan Gabriel Juscamaita Morales
MESA : N°5
INTEGRANTES:
Tinoco León, Sheila
Cachique Aguilar, Scott
Serrano Garcia, Josselyn
Salazar Espinoza, Michelle
La Molina, Abril del 2015
I. INTRODUCCIÓN:
La tinciónacido-resistente es una tinción diferencial que mide en células teñidas la resistencia a la decoloración mediante un ácido. La propiedad de ácido resistente en ciertas micobacterias y actinomicetos esta correlacionada con su alto contenido lipídico.
El procedimiento consiste en teñir con carbolfucsina caliente, decolorar con una solución de alcohol-ácido y reteñir con un contrastante. Las bacteriasacido-resistentes se decoloran muy lentamente con la solución de alcohol-ácido y retienen el colorante inicial en comparación a otros microorganismos que no logran hacerlo.
Este tipo de coloración es utilizada en el estudio y diagnóstico de enfermedades causadas por especies acido-resistentes y también para la diferenciación de estructuras resistentes como son las endosporas bacterianas que son capacesde sobrevivir por largos periodos en ambientes desfavorables, en condiciones extremas de alta temperatura o bajo la acción de agentes químicos entre otros.
Las técnicas más utilizadas es la técnica de Dӧrner y la de Schaeffer & Fulton. En la primera se emplea carbolfucsina para teñir la espora y nigrosina como decolorante y contraste. Mientras que en el segundo se emplea carbolfucsina para teñirla espora, alcohol-acido para decolorar y verde malaquita como colorante de contraste. En ambas se emplean altas temperaturas pero en distinta forma.
II. OBJETIVOS:
Distinguir a través de dos técnicas de tinción diferencial la presencia de endosporas bacterianas y diferenciarlas de las estructuras vegetativas normales.
III. PARTE EXPERIMENTAL:
Técnica de Dӧrner
1. Hacer unasuspensión concentrada del organismo en 2 o 3 gotas de agua destilada en un tubo pequeño.
2. Añadir igual volumen de carbolfucsina y colocar el tubo a Baño María hirviendo por 10 minutos.
3. Transferir una gota de la suspensión a una lámina porta objetos.
4. Agregar una gota de nigrosina y extender la mezcla con ayuda de otra lamina hasta obtener una delgada película.
5. Secar la lámina al aire o conpapel secante.
6. Examine al microscopio.
Endospora presente en Bacillus sp
Con la técnica de Dorner se observa la endospora se tiñe de rojo, la parte vegetativa incolora y toda la estructura de negro. Lamentablemente en clase no se pudo identificar del todo bien debido al tiempo que falto darle a las muestras al aplicarle los tintes y dejarlos en baño maria.
Técnica de Schaeffer & Fulton
1.Preparar una muestra fija del microorganismo.
2. Agregar carbolfucsina hasta cubrirla completamente.
3. Caliente la lámina con el colorante haciéndola pasar ligeramente por la llama del mechero hasta que desprenda vapores.
4. Mantener esta condición durante 3 minutos, evitando que el colorante se seque o entre en ebullición.
5. Lavar con alcohol acido hasta que resulte incoloro.
6. Enjuagar conagua.
7. Cubrir con unas gotas de verde malaquita dejando que actúe por 2 minutos.
8. Enjuagar con agua y secar la lámina al aire o con papel secante.
9. Examine al microscopio. (Moreno, Ramos, Villena, & Correa, 2015)
Endospora presente en Bacillus sp
Con la técnica de Schaffer y Fulton se pudo observar la endospora teñida de rojo y la parte vegetativa de verde. En clase se pudo identificar mejorlas endosporas pero aun asi había un grado de dificultad en encontrarlas.
IV. DISCUSIÓN:
Con la técnica de Dörner se observa que la endospora se tiñe de rojo, la parte vegetativa incolora y toda la estructura de negro oscuro. Esta técnica fue la más sencilla de llevar a cabo ya que el baño maría asegura que se impregne bien el colorante y hay menor riesgo de que la estructura se decolore con...
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
INFORME N°3
TÍTULO : “Tinción diferencial Acido-Resistente”
PROFESOR : Juan Gabriel Juscamaita Morales
MESA : N°5
INTEGRANTES:
Tinoco León, Sheila
Cachique Aguilar, Scott
Serrano Garcia, Josselyn
Salazar Espinoza, Michelle
La Molina, Abril del 2015
I. INTRODUCCIÓN:
La tinciónacido-resistente es una tinción diferencial que mide en células teñidas la resistencia a la decoloración mediante un ácido. La propiedad de ácido resistente en ciertas micobacterias y actinomicetos esta correlacionada con su alto contenido lipídico.
El procedimiento consiste en teñir con carbolfucsina caliente, decolorar con una solución de alcohol-ácido y reteñir con un contrastante. Las bacteriasacido-resistentes se decoloran muy lentamente con la solución de alcohol-ácido y retienen el colorante inicial en comparación a otros microorganismos que no logran hacerlo.
Este tipo de coloración es utilizada en el estudio y diagnóstico de enfermedades causadas por especies acido-resistentes y también para la diferenciación de estructuras resistentes como son las endosporas bacterianas que son capacesde sobrevivir por largos periodos en ambientes desfavorables, en condiciones extremas de alta temperatura o bajo la acción de agentes químicos entre otros.
Las técnicas más utilizadas es la técnica de Dӧrner y la de Schaeffer & Fulton. En la primera se emplea carbolfucsina para teñir la espora y nigrosina como decolorante y contraste. Mientras que en el segundo se emplea carbolfucsina para teñirla espora, alcohol-acido para decolorar y verde malaquita como colorante de contraste. En ambas se emplean altas temperaturas pero en distinta forma.
II. OBJETIVOS:
Distinguir a través de dos técnicas de tinción diferencial la presencia de endosporas bacterianas y diferenciarlas de las estructuras vegetativas normales.
III. PARTE EXPERIMENTAL:
Técnica de Dӧrner
1. Hacer unasuspensión concentrada del organismo en 2 o 3 gotas de agua destilada en un tubo pequeño.
2. Añadir igual volumen de carbolfucsina y colocar el tubo a Baño María hirviendo por 10 minutos.
3. Transferir una gota de la suspensión a una lámina porta objetos.
4. Agregar una gota de nigrosina y extender la mezcla con ayuda de otra lamina hasta obtener una delgada película.
5. Secar la lámina al aire o conpapel secante.
6. Examine al microscopio.
Endospora presente en Bacillus sp
Con la técnica de Dorner se observa la endospora se tiñe de rojo, la parte vegetativa incolora y toda la estructura de negro. Lamentablemente en clase no se pudo identificar del todo bien debido al tiempo que falto darle a las muestras al aplicarle los tintes y dejarlos en baño maria.
Técnica de Schaeffer & Fulton
1.Preparar una muestra fija del microorganismo.
2. Agregar carbolfucsina hasta cubrirla completamente.
3. Caliente la lámina con el colorante haciéndola pasar ligeramente por la llama del mechero hasta que desprenda vapores.
4. Mantener esta condición durante 3 minutos, evitando que el colorante se seque o entre en ebullición.
5. Lavar con alcohol acido hasta que resulte incoloro.
6. Enjuagar conagua.
7. Cubrir con unas gotas de verde malaquita dejando que actúe por 2 minutos.
8. Enjuagar con agua y secar la lámina al aire o con papel secante.
9. Examine al microscopio. (Moreno, Ramos, Villena, & Correa, 2015)
Endospora presente en Bacillus sp
Con la técnica de Schaffer y Fulton se pudo observar la endospora teñida de rojo y la parte vegetativa de verde. En clase se pudo identificar mejorlas endosporas pero aun asi había un grado de dificultad en encontrarlas.
IV. DISCUSIÓN:
Con la técnica de Dörner se observa que la endospora se tiñe de rojo, la parte vegetativa incolora y toda la estructura de negro oscuro. Esta técnica fue la más sencilla de llevar a cabo ya que el baño maría asegura que se impregne bien el colorante y hay menor riesgo de que la estructura se decolore con...
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