Informe 5





Informe Laboratorio 5 Microbiología Aplicada
“Análisis Microbiológico de Agua”









INTRODUCCIÓN

Todo individuo, o agrupación de individuos, requieren de un ambiente o medio necesario en el cual desarrollarse, que le permita crecer sinproblemas, evolucionar, reproducirse, etc..

Este ambiente o espacio, o medio, debe satisfacer cada uno de los requerimientos nutricionales básicos para que aquellos individuos en él, se desarrollen favorablemente. Esta condición, debe cumplirse para todo individuo, ser o especie que habite el planeta Tierra. Desde los animales más grandes que puedan existir, hasta los más diminutos. Tal es el caso delas bacterias, las cuales necesitan de distintos medios de cultivo en los cuales desarrollarse, ya que, de acuerdo a sus características y diferencias específicas, requieren de medios distintos.
















Objetivos

Preparar un método de determinación de coliformes totales y de coliformes fecales
Nombrar los medios de cultivo para coliformes totales y fecales
Diferenciar los procedimientosde análisis para coliformes totales y fecales
Calcular el NMP para los coliformes totales y coliformes fecales
Preparar pruebas bioquímicas IMVIC
Nombrar los géneros pertenecientes al grupo coliformes total y fecal

Materiales y Métodos

Asa Loop
Gradilla
Estufa de Incubación
Baño Termorregulado
Agar Levine
Tubos con Caldo Lauril Sulfato Triptosa
Tubos con Caldo Bilis Verde Brillante
Tubos conCaldo EC
Solución Reguladora De Peptona
Pipetas Graduadas
Placas de Petri
Campanas Durham
Mechero










Métodos
NMP DE COLIFORMES EN AGUA
- Prueba Presuntiva

Dilución
Tomar 1 ml de la muestra con una pipeta estéril y vierte en un tubo que contenga 9 ml. de solución reguladora de peptona, mezclar cuidadosamente y aspirar ocho a diez veces con una pipeta. De este modose obtiene la dilución 10-1
Con la misma pipeta, se toma 1 ml. de la primera dilución y se vierte en el tubo de la segunda dilución, que contiene 9 ml. de solución reguladora de peptona.
se mezcla ésta con una pipeta nueva, y se repite la misma operación con un tercer tubo.
Se deben agitar cuidadosamente todas las diluciones.

Inoculación
Inocular 9 tubos que contengan Caldo LaurilSulfato Triptosa con campana Durham:
- 3 tubos con 1 ml. de la dilución 10-1
- 3 tubos con 1 ml. de la dilución 10-2
- 3 tubos con 1 ml. de la dilución 10-3
Llevar todos los tubos a la incubadora a 35°C durante 24 a 48 horas.
Después de los tubos ya incubados, observar la formación de gas en las campanas Durham a las 24 horas. En caso negativo incubar por 24 horas más.
Registrar el número de tubospositivos de cada dilución.
- Procedimiento para Confirmar Coliformes Totales

Mezclar por agitación el tubo de la prueba presuntiva y transferir un inóculo con el asa de platino a tubos que contengan Caldo BVB. Se debe tener la precaución de enfriar el asa para asegurar que se transfiere un inóculo de cultivo viable.
Llevar los tubos con Caldo BVB a la incubadora a 35°C durante 48 horas.
Despuésdel período de incubación observar la formación de gas en las campanas Durham del Caldo BVB.
Registrar el número de tubos positivos de cada dilución.




- Procedimiento para Confirmar Coliformes Fecales

Mezclar por agitación el tubo de la prueba presuntiva y transferir un inóculo con asa de platino a tubos que contienen Caldo EC temperados previamente a 44.5°C por 30 minutos.
Los tubos de CaldoEC se incuban en un baño de agua con cubierta a 44.5°C por 24 horas.
El nivel de agua del baño debe sobrepasar el nivel de caldo de los tubos.
Después del período de incubación en un baño de agua, observar la formación de gas en los tubos de Caldo EC.
Registrar el número de tubos positivos de cada dilución.

- Prueba Confirmativa para Escherichiacoli

De cada tubo de Caldo EC que presente...