INFORME BIOQUIMICA Enzimologia







INFORME DE LABORATORIO
“Enzimología”
Bioquímica









Nombre de Autores:
Almonacid González karina
Delgado Morales Francisca
Vargas Villarroel ClaudiaVillegas Mardones Priscilla

Docente: Muller González Andrés
Fecha: 29-04-1015

Introducción
Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica y estructural que catalizan reacciones químicas, son catalizadores de los sistemas biológicos. Su importancia está en su capacidadde acelerar las reacciones, multiplicando su velocidad. Las enzimas actúan a un pH óptimo en donde presentan su máxima de actividad catalítica. En los extremos del “pH óptimo”, la actividad catalítica desciende en forma abrupta con la temperatura, se comportan de modo similar (temperatura óptima)1.

En este laboratorio realizamos 2 actividades en el que observamos efectos en distintastemperaturas, pH y la presencia de actividad enzimática en cada unas de las soluciones.

Objetivos
- Analizar la actividad enzimática en muestras biológicas
- Predecir el efecto de las variaciones de pH y la temperatura sobre la actividad enzimática.

Procedimiento Experimental- Materiales y Métodos.
ACTIVIDAD N° 1: Efecto de la temperatura sobre la hidrolisis enzimática del almidón.

Se rotularon 4tubos de ensayo. A Cada uno se le agregó 2 ml de preparación enzimática, 1 ml de la solución de cloruro de sodio 0,03 M, 1 ml de la solución tampón fosfato pH 7,0 y 2 ml de solución de almidón 1 % m/v. Después se mezclaron los tubos (sin agitar) y se incubaron durante 15 minutos a distintas condiciones. Tubo 1 a 0°C (sobre hielo), tubo 2 a 37°C en un baño termorregulador (MEMMER), tubo 3 a 100°C (bañomaría) y tubo 4 a temperatura ambiente (sobre el mesón). Una vez transcurridos 15 minutos se le agregó 1 gota de Lugol, se mezcló bien y se observaron los resultados.
ACTIVIDAD N° 2: Efecto del pH sobre la actividad de la amilasa salival.
Se rotularon 5 tubos de ensayo y se agregó a cada uno: 2 ml de preparación enzimática, 1 ml de solución de cloruro de sodio 0,03M y 2 ml de solución dealmidón 1% m/v. Posteriormente se adicionó al 1er tubo 1 ml de tampón fosfato pH 2,0, al 2do 1 ml de buffer pH 5,0, al 3er tubo 1 ml buffer pH 7,0, al 4to 1 ml buffer pH 10,0 y por último al 5to tubo 1 ml buffer pH 12,0. Luego se agitó cada tubo suavemente y se incubaron a temperatura ambiente durante 15 minutos. Una vez transcurridos los 15 minutos se agregaron 1 gota de lugol, se mezcló y seobservaron los resultados.





Resultados

Actividad 1: Efecto de la temperatura sobre la hidrólisis enzimática del almidón.
Tubo
condiciones
Presencia de Actividad Enzimática
1
0°C (sobre hielo)
alto
2
37°C (Baño termorregulador)
Intermedio
3
100°C (Baño María)
Intermedio
4
Temperatura ambiente
intermedio

Actividad 2: Efecto del pH sobre la actividad de la amilasa salival.
Tubo
AdiciónPresencia de Actividad Enzimática
1
Tampón fosfato pH 2,0
Alto
2
Buffer pH 5,0
Mediano
3
Buffer pH 7,0
intermedio
4
Buffer pH 10,0
Intermedio
5
Buffer pH 12,0
Sin color



Discusión

Las condiciones óptimas para una hidrólisis enzimática del almidón son la presencia de un pH óptimo (6.8), concentraciones de sustratos y enzimas adecuadas, temperatura óptima, alrededor de 37.5° C. Un buffer paraestabilizar el pH y Concentración adecuada e iones (NaCl).
En la hidrólisis del almidón por acción de la amilasa, el lugol se incorpora a la fracción helicoidal del almidón dando un color azul y a medida que la hidrólisis progresa, el color azul va desapareciendo y cambia a rojizo o café claro. La reacción existente entre la amilasa salival y el almidón es que la enzima hidroliza al almidón en los enlaces...