Informe bioquimica

INFORME
LABORATORIO BIOQUIMICA

OBJETIVOS

PRACTICA No 1

• Utilizar las técnicas de solubilidad diferencial y de centrifugación en el
fraccionamiento de un tejido animal en sus principales constituyentes.

• Comparar los tejidos tratados de acuerdo con sus componentes principales.

PRÁCTICA No. 1

Fraccionamiento de tejidos en sus principales constituyentes: carbohidratos,lípidos, proteínas y ácidos nucleicos

REACTIVOS

ATA (acido tricloroacetico) al 10% Arena lavada

Etanol del 95% etanol éter cloroformo (2: 2:1)

NaCI al 10%

Tejidos: hígado, corazón, páncreas de un animal utilizado en el trabajo
experimental.

PROCEDIMIENTO

Cada grupo hará el fraccionamiento químico sobre un tejido determinado. Para comparar los diferentes tejidos desde el punto devista del contenido de carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos, deberá confrontar sus resultados con los obtenidos por los otros grupos.
A cada grupo se le entregará una muestra de tejido en ATA al 10% con los siguientes datos:

• Peso del tejido.

• Origen del tejido.

• ATA al 10% adicionado (1,5 mI/g de tejido).

Cada grupo recibirá cinco frascos donde guardará y marcaráadecuada-
mente cada fracción que obtenga.

En la práctica se preparo un reactivo con una solución 2:2:1 de etanol, etanol éter y cloroformo como se relaciona a continuación, los diferentes grupos prepararon el restante de reactivos según la práctica.

➢ Etanol al 95% = 20 ml
➢ Etanol éter = 20 ml
➢ Cloroformo = 10 ml
Tomamos el tejido y lo pesamos en la grameraelectrónica la cual nos da un peso de 5113 gramos al cual se adiciona 1.5ml/g de ATA.
Tomamos 1 gr de arena, maceramos el tejido de hígado y luego lo
tritulamos junto al arena y adicionamos 1ml del reactivo preparado lo enviamos al centrifugado durante 5 minutos el resultado nos entrega una muestra con dos fases un sobrenadante y un precipitado o residuo.
En el residuo se encuentran lípidos,proteínas, ácidos nucleicos y la arena. En cuanto al sobrenadante encontraremos carbohidratos. Mono y polisacáridos.
Continuamos la practica según los pasos que muestra la guía en la cual rotulamos todas las muestras en nuestros tubos de ensayo para continuar la siguiente practica.

CUESTIONARIO

1. ¿Por qué se recomienda mantener los tejidos que se fraccionan a baja
temperatura?

RTA: Serecomienda mantenerlos en temperatura bajas ya que en condiciones normales estos pierden sus propiedades características y asi no se pueden observar los cambios.

2. ¿Qué sucede al contenido celular si la temperatura a que se mantiene es de 37°C?

RTA: Se observara una desnaturalización en su estructura celular.

3. ¿Cuál es el fundamento de la centrifugación? Haga una explicación breve de losprincipios.

RTA: La centrifugación es un método por el cual se pueden separar sólidos de líquidos de diferente densidad mediante una centrifugadora, la cual imprime a la mezcla un movimiento rotatorio con una fuerza mayor que la de la gravedad, provocando la sedimentación de los sólidos o de las partículas de mayor densidad. Este es uno de los principios en los que la densidad: Todas lículas, porposa, sectadas por cualquier y una extensa variedad de técnicas derivadas de esta. Donde la fuerza es mayor a la gravedad.

PRÁCTICA No. 2:

Caracterización de las fracciones obtenidas a partir de diferentes tejidos

OBJETIVO

Investigar la presencia de carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos en las tracciones obtenidas de diferentes tejidos del animal empleado, utilizandopara ello reacciones características para cada uno de los componentes anteriores.

MUESTRA PARA SER ANALIZADA M4 = PROTEINAS

DESNATURALIZACION

Por acción de pH extremos se destruyen los puentes de hidrógeno que
mantienen la estructura secundaria de las proteínas. Las proteínas a temperaturas mayores de 50°C precipitan, por formación de agregados que resultan de la destrucción de la...