Informe Cromatografia



INFORME CROMATOGRAFIA






QUIMICA Y LABORATORIO










LUZ AMPARO VELEZ HOLGUIN





ABRIL 29 DE 2013








UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
ESCUELA DE MICROBIOLOGIA
MICROBIOLOGIA Y BIOANALISIS
MEDELLIN


OBJETIVOS

Conocer y aplicar la técnica de cromatografía en capa fina, sus características y los factores que en ellaintervienen.

Relacionarla polaridad de las sustancias que se analizan y la de los solventes utilizados.

Calcular valores de Rf de varias sustancias y mediante este determinar los compuestos desconocidos

Conocer la cromatografía en columna como técnica de separación de mezclas de sustancias, sus características y los factores que en ella intervienen.


CROMATOGRAFIA

La cromatografía, es la técnica más usadapara el análisis, separación y purificación de mezclas de compuestos orgánicos, que la mayoría de las veces sólo se pueden separar muy difícilmente por otros procedimientos.
Esta técnica está basada en las diferencias de polaridad existentes entre los diferentes productos que componen una mezcla. Por esta razón, la separación cromatográfica, dependerá de las condiciones de separación elegidas paradiferenciar, adecuadamente, los componentes de la mezcla a separar, en función de su polaridad. Existen dos técnicas cromatográficas generales o básicas, denominadas cromatografía en columna y cromatografía en capa fina.

Cromatografía de capa fina

Consiste en una placa rectangular o cuadrada, denominadas cromatoplacas, o simplemente placas sobre cuya superficie se deposita una capauniforme muy delgada (en ocasiones de algunas micras de espesor) de una sustancia absorbente, casi siempre silica gel o alúmina. En esta se involucran una fase móvil que es liquida, y la fase estacionaria que es un solido
La fase móvil es líquida y la fase estacionaria consiste en un sólido. La fase estacionaria será un componente polar y el eluyente será por lo general menos polar que la faseestacionaria, de forma que los componentes que se desplacen con mayor velocidad serán los menos polares.
La mezcla a analizar se deposita a una pequeña distancia del borde inferior de la placa y se introduce en una cubeta que contiene la fase móvil, que asciende a lo largo de la placa por capilaridad, desplazando a los componentes de la mezcla a diferentes velocidades, lo que provoca su separación.Cuando el frente del disolvente se encuentra próximo al extremo superior de la placa esta se saca y se visualiza.

Determinación del Rf

La retención se puede explicar en base a la competencia que se establece entre el soluto a separar y la fase móvil por adsorberse a los centros activos polares de la fase estacionaria. Así, las moléculas de soluto se encuentran adsorbidas en la fase estacionaria ya medida que se produce la elución van siendo desplazadas por la fase móvil.
La relación entre las distancias recorridas por el soluto y por el eluyente desde el origen de la placa se conoce como Rf, y tiene un valor constante para cada compuesto en unas condiciones cromatográficas.
La relación entre la distancia recorrida por un compuesto y por el disolvente desde el origen se conoce comoRf.

Rf=



Cromatografía de columna: Es el método más utilizado para la separación de compuestos orgánico a escala preparativa. La fase estacionaria se deposita en el interior de una columna de vidrio que termina, en un estrechamiento con una llave. La mezcla se deposita sobre la parte superior de la fase estacionaria mientras que la fase móvil atraviesa el sistema. Los compuestos vansaliendo por separado de la columna y se recogen en fracciones, los más polares quedan más retenidos y para que salgan generalmente hace falta aumentar la polaridad del disolvente. El tiempo necesario para eluir un compuesto de la columna se llama tiempo de retención. El adsorbente más utilizado para cromatografía de columna es gel de sílice, aunque también se puede emplear alúmina y florisil. La...