informe de bioquimica



DETERMINACIÓN CUANTIABA DE PROTEÍNAS


RESUMEN
Las proteínas son grandes constituyentes de un organismo, en la investigación de las mismas es importante poder saber qué tipo de proteína tenemos y su cantidad dentro de una muestra, hay pruebas sencillas que nos dan una idea sobre qué tipo de proteínas estamos trabajando los cuales son técnicas de colorimetría, pero esto no daninformación de la cantidad de proteína en la muestra; en el siguiente documento se presenta un análisis cuantitativo por el método de Lowry para una muestra de BSA, esto con el fin de poder lograr hacer una curva de calibración de la muestra BSA.
INTRODUCCIÓN
Las proteínas están conformadas por muchos aminoácidos unidos mediante los enlaces peptídicos y son las biomoléculas más versátiles y diversas. Lasproteínas desempeñan un papel fundamental para la vida y son imprescindibles para el crecimiento del organismo donde realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan funciones estructurales, inmunológicas, enzimáticas , homeostáticas, de protección y de transmisión de señales. Las proteína presentan mayor complejidad entre mas aminoácidos presenten, pero además por lapresencia de los grupos prostéticos, y pueden ser cuantificadas mediante diferentes métodos, unos menos sensibles y otros más sensibles, los cuales desnaturalizan la proteína.
En la presente práctica se utilizó el método de Lowry, el cual es desnaturalizante pero más sensible, donde se halló lo respectivos valores de transmitancia y absorbancia para una muestra a diferentes concentraciones aanalizar incluida una muestra problema, para finalmente hallar la concentración de proteínas dentro de la misma.

OBJETIVOS
Distinguir los diferentes métodos de cuantificación de proteínas y el grado de sensibilidad correspondiente.
Determinar las concentraciones de proteína en diferentes muestras haciendo uso de la técnica de espectrofotometría (UV-vis).












DATOS
TABLA No.1. Volúmenes de las sustancias en las muestras
solución
Vol(ml). BSA
Vol(ml). AGUA
Vol(ml). LOWRY
Vol(ml) FOLIN
1
0.1
1.4
5
0.5
2
0.3
1.2
5
0.5
3
0.5
1.0
5
0.5
4
0.7
0.8
5
0.5
5
0.9
0.6
5
0.5
6
1.1
0.4
5
0.5
7
1.3
0.2
5
0.5
8
1.5
-
5
0.5
BLANCO
-
1.5
5
0.5
MP2
1
0.5
5
0.5

TABLA No. 2. Valores de transmitancia y absorbancia medidos en ellaboratorio.
Solución
Trasmitancia
Absorbancia
1
76,4
0,118
2
55,6
0,255
3
41,1
0,386
4
30,3
0,519
5
24,1
0,617
6
18,0
0,744
7
14,7
0,834
8
12,3
0,910
Blanco
96,2
0,017
MP 2
52,1
0,287

CÁLCULOS Y RESULTADOS
Absorbancia calculada


TABLA No. 3. Valores de absorbancia calculados según transmitancia.
solucion
Transmitancia (T)
Absorbancia calculada
1
76,40.117
2
55,6
0.255
3
41,1
0.386
4
30,3
0.518
5
24,1
0.618
6
18,0
0.745
7
14,7
0.833
8
12,3
0.910

Concentraciones de las soluciones:



C1 = concentración de la muestra
C2 = concentración de la proteína (BSA)
V1 = volumen total de la muestra en el tubo de ensayo
V2 = volumen tomado de la muestra
Absorbancia verdadera de la muestra






TABLA No. 4.Concentración y absorbancia verdadera de la muestra calculada
Solución
Concentración de la muestra (mg/mL)
Absorbancia verdadera (Av)
1
0,0043
0,1010
2
0,0129
0,2380
3
0,0214
0,3690
4
0,0300
0,5020
5
0,0386
0,6000
6
0,0471
0,7270
7
0,0557
0,8170
8
0,0643
0,8930

Concentración de la muestra problema 2 acorde a la curva de calibración.
Acorde a la curva de calibración se obtienela ecuación de la recta

Donde Y es la absorbancia, X es la concentración de la proteína en la muestra.
Reemplazando los valores de absorbancia leídos del equipo en la ecuación y despejando la concentración se tiene.



Concentración de la muestra problema 2 por calculados.
Muestra problema 2 tiene una concentración en solución de 0,46 mg/mL, en esta solución el 52,8% corresponde a...