informe de fisica

Páginas: 9 (2091 palabras) Publicado: 24 de marzo de 2013

SEMINARIO 1
Métodos experimentales para el estudio de proteínas
Ernesto Gallego Burgos (71958088-N)

Problemas y cuestiones

1. Contesta las siguientes cuestiones relacionadas la electroforesis:
a. ¿En qué se basa la electroforesis para la separación de proteínas?
La electroforesis es una técnica utilizada para la separación de proteínas, que se fundamenta en el desplazamiento delas proteínas cargadas en un campo eléctrico.
b. Indicar las diferencias entre electroforesis en geles de poliacrilamida en condiciones nativas y desnaturalizantes. ¿Con cuál de las dos técnicas se puede determinar la masa molecular de una proteína?
Las diferencias entre los dos geles son:
-Condiciones nativas: Las proteínas mantienen su estructura tridimensional y las distintas cadenaspolipeptídicas pueden permanecer unidas separándose según su carga y también en función de su forma y tamaño
-Condiciones desnaturalizadas: Se incluyen agentes desnaturalizantes que pueden ser desnaturalizados reductores y detergentes. También Cuando las proteínas se solubilizan en presencia del detergente aniónico SDS, este se adhiere a las proteínas rompiendo sus interacciones hidrofóbicas yproduciendo su desnaturalizándolas. Además el SDS produce que la relación entre la carga y la masa de las proteínas sea parecida, por lo que se separan por tamaños
Se puede calcular la masa molecular de una proteína a través de la técnica de electroforesis en condiciones desnaturalizantes, ya que la relación entre la carga y la masa de las proteínas es similar, y por lo tanto se separan en relacióna sus pesos moleculares.

c. En la electroforesis SDS-PAGE (SDS-polyacrilamide gel electrophoresis) qué papel desempeña el SDS, el 2-mercaptoetanol y la urea.
SDS: es un detergente aniónico que desnaturaliza las proteínas, que elimina sus estructuras secundaria y terciaria y también confiere carga negativa a cada proteína en relación a su masa. Sin SDS, las diferentes proteínas con masasmoleculares parecidas migran de forma diferente a causa de las diferencias en la proporción entre carga y masa, porque cada proteína posee un punto isoeléctrico distinto.
2-Mercaptoetanol : el 2-mercaptoetanol es un agente reductor que se usa para romper los enlaces disulfuro y cerciorarse de que la proteína ha sido desnaturalizada completamente antes de ser cargada en el gel, y de esta formagarantizar que avanza de manera uniforme.
Urea: es agente desnaturalizante, que Interfiere con las interacciones hidrofóbicas de las proteínas y tiene que ser incluido en todos los tampones que se empleen en la preparación de los geles.

d. ¿Es esta técnica válida para determinar la masa molecular de una proteína oligomérica?
No es una técnica valida ya que el SDS no produce una desorganizacióncompleta de la estructura sino parcial por lo que las cadenas quedan más o menos desplegadas según la posición de los puentes disulfuro.




2. Se determinó la masa molecular de una proteína X desarrollando simultáneamente la electroforesis con proteínas patrones (de peso molecular conocido), en geles de poliacrilamida, a pH 8,0 y en presencia deSDS. Los resultados obtenidos fueron los siguientes:

Proteína Movilidad relativa (Rf) PM (Da)
Seroalbúmina 0,60 68.000
Quimiotripsina 0,94 23.000
Citocromo C 1,14 12.000
Proteína X 0,82 ¿?

a. A partir de los patrones de pesos moleculares, representar la gráfica de calibrado
b. Calcular la masa molecular de la proteína X, sabiendo que la proteína sólo presenta una subunidadProteína
Movilidad relativa
PM
Log PM
Seroalbúmina
0,60
68000
4,83
Quimiotripsina
0,94
23000
4,36
Citocromo C
1,14
12000
4,08
Proteína X
0,82
¿?
¿?


b) Proteína X
y= -1,3882x +5,6635
y= -1,3882(0,82) +5,6635
y= 4,5251
-Para calcular el peso molecular hay que hacer la inversa del logaritmo:
104,5251=33510,12 Da








3. Predecir el orden de...
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