Informe de laboratorio de Espectrofotometría

ESPECTROFOTOMETRIA Y CURVA DE CALIBRACION


OBJETIVOS:
1. Determinar la absorbancia del azul de metileno en diferentes diluciones.
2. Elaborar una curva de calibración para Azul de metileno
3. Determinar la concentración de una muestra problema a partir de la curva de calibración.

INTRODUCCIÓN:
La técnica de espectrofotometría consiste en obtener las concentraciones de diferentesmuestras por medio de la medición de luz absorbida o transmitida en una solución coloreada. Por medio del espectrofotómetro se podrá obtener la absorbancia (capacidad de absorber luz) de cada dilución de azul de metileno; así lograremos obtener datos para realizar una curva de calibración; con la cual se representa la relación proporcional entre la concentración de la muestra y la absorbancia de esta.Se tiene una muestra problema con concentración desconocida que se calculara posteriormente con la ecuación encontrada en la grafica anterior.

MARCO TEORICO
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas que absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luzabsorbida dependen de forma lineal de la concentración. Además es usada para identificar compuestos por su espectro de absorción y conocer la concentración de un material o sustancia, esto último permite, seguir el curso de reacciones químicas y enzimáticas así como determinar enzimas y proteínas incluso ácidos nucleicos.
Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrómetro es empleadopara medir la cantidad de luz que una muestra absorbe, es decir la cantidad de luz que pasa por medio de una longitud de onda especifica. El instrumento opera por el paso de un haz de luz a través de la muestra y mide la atenuación de su intensidad al alcanzar al detector. Este haz de luz se compone de fotones. Cuando el fotón se encuentra con el analito, existe la posibilidad que el fotón seaabsorbido por el analito.
Las muestras en estos quipos se utilizan en estado líquido y son colocados en unas especies de compartimiento de las muestras de celdas transparentes de diferentes materiales. Se podría pensar que el termino luz solo se aplica a la forma visible de radiación electromagnética, sino también a las formas UV e IR, que son invisibles. Luz UV (200-400 nm) y la visible (400-800 nm).La transmitancia (T) es la relación entre la cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra que se encuentra en solución.
La absorbancia (A) es un concepto más relacionado con la muestra puesto que nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma.
Ley de Lambert-Beer
Lambert y Beer demostraron que la absorbancia (A), también llamada densidadóptica (D.O.) de una sustancia es directamente proporcional a la concentración (c) de la sustancia absorbente, la longitud del paso de luz (l) (espesor de la solución) y una constante denominada coeficiente de extinción o coeficiente de absorción (a), que es característico para cada sustancia a una longitud de onda () determinada.
A= Log I/Io = E*C*I
La absorbancia de una solución es directamenteproporcional a su concentración- a mayor número de moléculas mayor interacción de la luz con ellas-; también depende de la distancia que recorre la luz por la solución- a igual concentración, cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra más moléculas encontrara-; y por último, depende de la E, una constante de proporcionalidad –denominada coeficiente de extinción molar.

DATOS:
TuboBlanco
1
2
3
4
5
6
7
Disolución
0
1/1
1/2
¼
1/8
1/16
1/32
1/64
Solución Patrón (ml)
0
4
0
0
0
0
0
0
Cantidad de solución anterior (ml)
0
0
0
2
2
2
2
2
Agua (ml)
4
0
2
2
2
2
2
2

Muestra problema:
Absorbancia: 2.385
Diluida ¼ absorbancia: 1.197




RESULTADOS:
Concentración y absorbancia de azul de metileno:
Concentración (mol/L)
0
1.33x10-4...