Informe de laboratorio fingerprinting


PRÁCTICA: DNA Fingerprinting
INTRODUCCIÓN
Las características fisiológicas y morfológicas de cada individuo, ya sea un animal, planta, microorganismo o un ser humano, responden a un patrón único que es su composición genética. Esta identidad genética puede ser constatada a través de técnicas de biología molecular que permiten analizar el DNA. Dos métodos desarrollados con esta finalidadson la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), y el análisis del polimorfismo del tamaño de fragmentos de restricción (RFLP)(1). A través de cada una de estas técnicas obtenemos fragmentos de DNA que luego son sometidos a electroforesis, en geles de agarosa, con lo cual se forman patrones característicos de cada individuo. Los perfiles de ADN, únicos por individuo, así como las huellasdactilares, poseen diversas aplicaciones en medicina forense, análisis de paternidad, medicina diagnóstica, etc.
Independientemente de si la muestra es obtenida de sangre, saliva, cabello, etc. los patrones de DNA de un individuo son idénticos y también, presentan estabilidad en la línea germinal, por lo que las características correspondientes a un individuo pueden ser identificadas como pertenecientes auno u otro progenitor. Estos principios de identidad única, heredabilidad e idéntica estructura del DNA dentro de todos los tejidos del mismo individuo son los fundamentos de la técnica de DNA fingerprinting.(2)
El análisis de regiones repetidas del genoma de humanos (minisatélites) ha permitido conocer que su tamaño es variable en alelos de diferentes loci genéticos por variaciones en elnúmero de estas repeticiones. Así, cuando DNA de un individuo es aislado y tratado con enzimas de restricción de modo de obtener fragmentos, la observación del tamaño de los mismos arroja un perfil característico y a la vez diferente al de otros individuos (RFLP). El perfil varía considerablemente entre personas no emparentadas.
Aplicaciones forenses por DNA fingerprinting comprenden situaciones dedeterminación de identidad de sospechosos en homicidios y violaciones, la confirmación de la veracidad de una evidencia y la identificación de un hecho delictivo como aislado o serial. (3)






RESULTADOS:




La gráfica estará en un papel milimetrado y acá se obtendrán los resultados realizando una ecuación lineal del patrón de los fragmentos de restricción de HindIII (log (pb) vs.Distancia).
Ya obtenidas todas las relaciones entre la distancia recorrida y el log de la cantidad de pb del fragmento entonces se hará una gráfica (aproximadamente recta) en papel milimetrado. Se optó por parear las longitudes medidas con las abscisas de la gráfica (papel milimetrado)para con estas buscar su respectiva ordenada en dicha gráfica, que representaría el logaritmo de bp, a esta cifrase le saca el antilogaritmo y se obtiene la cantidad de pares de bases.

Sin embargo de forma teórica se decidió encontrar la ecuación de la recta usando dos puntos []
Posteriormente, tabulamos con dos puntos (25; 3.81671) y (30; 3.63959); dándonos: 3.81671=25A+C Y 3.63959=30A+C
Resolviendo este simple sistema de dos ecuaciones condos incógnitas se obtiene la siguiente relación: Con esta ecuación solo se necesitaría remplazar el X por la longitud desplazada para obtener el logaritmo de su pb y luego se realizará el antilogaritmo a este resultado para así obtener sus pares de bases.



1. A partir de los mapas de restricción de plasmidos indicar: ¿Cómo sería en patrón observado de la electroforesis si se digieren todoslos plasmidos con la enzima PvuII?














Teniendo en consideración que el tamaño del plasmido es de 5000pb y el corte con la PvuII va a producir fragmentos de longitud 519, 1967, 2514. Haciendo el mismo análisis con los plasmidos de todos los sospechosos del caso se calcula los fragmentos generados por la enzima PvuII en cada uno teniendo como resultado lo siguiente:...