informe de laboratorio


Universidad de Panamá
Facultad de Medicina
Escuela de Medicina

Laboratorio Nº7
Preparación de una electroforesis

Profesora:
Maribel González

Presentado por:
Sofía Rodríguez 8-894-2392
Marjorie Víquez 8-880-1320
Celia Yau 8-838-1586

Grupo:
2-3B

II semestre 2013



Introducción
La electroforesis en gel es un método que se emplea para separarmacromoléculas en función del tamaño, la carga eléctrica y otras propiedades físicas. El término electroforesis describe la migración de las partículas cargadas bajo la influencia de un campo eléctrico. «Electro» se refiere a la electricidad y «foresis», del griego phoros, significa «trasladar». Así pues, la electroforesis en gel es una técnica consistente en aplicar corriente eléctrica a las moléculaspara que atraviesen una placa de gel. La fuerza motriz de la electroforesis es la tensión eléctrica aplicada a los electrodos en ambos extremos del gel. Las propiedades de una molécula determinan la velocidad con que un campo eléctrico puede desplazarla a través de un medio gelatinoso.
Muchas macromoléculas biológicas importantes poseen grupos ionizables y, a un pH determinado, existen en solucióncomo especies cargadas eléctricamente, sean cationes (+) o aniones (-). Según la naturaleza de la carga neta, las partículas cargadas migrarán hacia el cátodo o hacia el ánodo. Así, por ejemplo, cuando se aplica un campo eléctrico a un gel con pH neutro, los grupos fosfato del ADN cargados negativamente lo harán migrar hacia el ánodo
Objetivos:
Aprender la técnica de electroforesis y susdiversos usos en la biología molecular.
Entender como la electroforesis separa fragmentos de DNA de tamaño diferente.
Calcular y preparar los geles de agarosa para la electroforesis.


Metodología

Resultados

Conclusión

Anexos
Preguntas:
1- Explique detallladamenyte cuales son los buffers utilizados en el corrido electroforético y sus componentes?
- Tris (Tris-(hidroximetil)-aminometano)- Ácido Bórico/Ácido Acético 
- EDTA (Ácido Etilendiaminotetraacético)
2- Cuales son sus propiedades y cuando se utilizan?
El buffer TAE (o Tris Acetato EDTA) es el más común usado en electroforesis en gel de de agarosa. TAE tiene la capacidad buffer más baja de los buffer existentes, sin embargo TAE ofrece la mejor resolución para ADN más grandes. Sin embargo, TAE requiere un voltaje más bajoy más tiempo. No obstante, el buffer TAE (Tris/Borato/EDTA) es frecuentemente usado para los fragmenteos de ADN pequeños (con menos de 500bp). 
El Tris es la molécula responsable del tamponamiento (regulación del pH).
El acetato contribuye a ajustar el pH deseado e igualmente a mantenerlo.
El EDTA es un quelante de cationes divalentes cuya función es secuestrar el Mg2+, con lo que se evita quelas posibles nucleasas presentes degraden los ácidos nucleicos de la muestra (la mayoría de las nucleasas requieren Mg2+ como coenzima).

El empleo del TBE como buffer de electroforesis es particularmente útil para discriminar a
pequeños fragmentos de DNA
3- ¿Cuáles son los métodos mas utlizados para visualizar y cuantificar el DNA en corrido electroforético?
Uno de los métodos másutilizados para la cuantificación del ADN es el análisis de la
absorción UV, ya que los nucleótidos poseen máximos de absorción alrededor de 260 nm
ESPECTROFOTOMETRIA
Los ácidos nucleídos separados en geles de agarosa pueden visualizarse mediante tinción
con colorantes fluorescentes, lo cual permite evaluar su integridad y estimar su concentración
mediante un análisis comparativo con patrones deconcentración conocida. Los colorantes
fluorescentes actúan mediante inserción entre las pares de bases que conforman el ácido
nucleíco. El bromuro de etidio es ampliamente utilizado para la visualización de ADN
4- ¿Qué es el buffer de carga y que propósitos cumple en la electroforesis?
Buffer de Carga: es un buffer contiene sucrosa o glicerol, lo cual da peso a la
muestra para que el...