Informe De Tincion De Gram

1. PROPÓSITO

La tinción de gram es un tipo de tinción diferencial que se emplea en microbiología para la visualización de bacterias, sobretodo en muestras clínicas.

Los propósitos que se tienen en el presente trabajo práctico son básicamente familiarizarse con las técnicas que se utilizan para:

* Elaboración de frotis a partir de colonias obtenidas en cultivo o de muestrasclínicas.
* Realizar correctamente una coloración Gram.
* Observar bacterias en preparaciones fijas coloreadas con la coloración de Gram.


2. MARCO TEÓRICO

3.1. ESTRUCTURA DE LA PARED CELULAR DE LAS BACTERIAS
Es la envoltura que da forma y rigidez a la bacteria, se sitúa por fuera de la membrana plasmática y está presente en todas las bacterias. Esta estructura permite a labacteria soportar las fuertes presiones osmóticas de su interior.
La pared celular está compuesta por un polímero mixto denominado peptidoglicano, glucopéptido o mureína. Esta polímero está formado por una cadena lineal de dos aminoazúcares alternados: N-acetilglucosamina y ácido N-acetilmurámico. A cada residuo de ácido murámico se halla ligado un tetrapéptido compuesto de D y L-aminoácidosalternados. Aproximadamente un tercio de los tetrapéptidos presentes intervienen en la unión lateral entre cadenas adyacentes de mureína. Algunas de estas cadenas tetrapeptídicas se unen entre sí por medio de otros péptidos cortos que forman puentes cruzados entre las cadenas de aminoácidos. Las cadenas de mureína unidas por esos puentes peptídicos resultan en una supermolécula gigante única queenvuelve a la bacteria y forma la sólida y rígida pared.

Pared celular en las bacterias Gram positivas
La pared celular de las Gram (+) es más gruesa que la de los Gram (-). La pared células de los Gram (+) contiene dos componentes fundamentales, el peptidoglicano y ácidos teicoicos. Del 80%-90% de la pared de la célula Gram-positiva es peptidoglucano, los ácidos teicoicos están formados porpolímeros de glicerol fosfato o ribitol fosfato con sustituyentes laterales (azúcares simples, aminoazúcares y aminoácidos). Cerca del 50% de la pared bacteriana está compuesta por ácidos teicoicos. Una importante cantidad de ácidos teicoicos se hallan unidos a glicolípidos de la membrana citoplasmática, por lo que se los llama ácidos lipoteicoicos. Estos ácidos parecen participar en el anclaje de lapared celular a la membrana citoplasmática. Los ácidos teicoicos se encuentran sólo en las bacterias Gram (+) y constituyen los mayores determinantes antigénicos que definen la individualidad inmunológica de esas bacterias.

Pared celular en las bacterias Gram negativas
El espesor de la pared celular de una bacteria Gram (-) es considerablemente menor que el de una Gram (+). Inmediatamente porfuera de la membrana citoplásmica se encuentra una delgada capa de peptidoglucano que representa tan sólo un 5% a 10% del peso de la pared celular, La cantidad de mureína es mucho menor en los Gram (-), pero igualmente forma una fina pero muy resistente monocapa que protege a la bacteria de la baja osmolaridad exterior y le da su forma, como ocurre con los Gram (+). La pared celular de los Gram (-)carece de ácidos teicoicos. Sólo unas pocas cadenas de mureína están unidas a otras cadenas paralelas por medio de los tetrapéptidos y son suficientes como para formar una única malla de mureína. La zona comprendida entre la superficie externa de la membrana citoplásmica y la superficie interna de la membrana externa se conoce como espacio periplásmico. Este espacio es un compartimento que contienediversas enzimas hidrolíticas importantes para la degradación y metabolización de las macromoléculas de gran tamaño. (1)


3.2. TINCIÓN DE GRAM
La tinción de Gram debe su nombre al Bacteriólogo Danés Christian Gram que la desarrollo en 1844. Es una tinción diferencial, cuyo fundamento es clasificar a las bacterias en Gram + y Gram -, de acuerdo a las propiedades de su pared...