Informe De Viabilidad Celular

VIABILIDAD CELULAR


Resumen
Una suspensión celular se caracteriza por presentar un número de partículas microscópicas dispersas en un fluido. Habitualmente será necesario determinar tanto ladensidad de las células en la suspensión como el porcentaje de éstas que son viables. Para determinar la densidad de las células en este trabajo se empleo la cámara de contaje celular (cámara deNeubauer) usando como medio de tinción el azul de tripán.
Palabras clave: Azul de tripán, cámara de Neubauer.
Introducción
La cámara de Neubauer es un instrumento de vidrio que se utiliza para realizarrecuentos manuales. Presenta dos zonas rayadas idénticas separadas por un surco horizontal limitadas a cada lado por un canal vertical; cada zona es un cuadrado de 3 mm de lado dividido en 9 cuadrados de1 mm de lado, por lo cual su área es de 1 mm2. La cámara tiene una profundidad de 0,1 mm.
El recuento se calcula teniendo en cuenta el área contada, la profundidad de la cámara y la diluciónempleada. Para ello se emplea la siguiente fórmula:
Conteo (celulas/ml)=c c(n c c*A*P)*FD*1000

Donde:
cc: conteo celular
n c c: numero de cuadrantes contados
A: área de la cámara
P: profundidadde la cámara
FD: factor de dilución
La viabilidad celular puede ser evaluada por cambios morfológicos, por cambios en la permeabilidad de la membrana y/o el estado fisiológico; inferido a partir dela exclusión de ciertos colorantes o la captación y retención de otros.
Uno de los colorantes más usados es el azul de tripán, con este, las células que tienen la membrana intacta lo excluyen,mientras que las células no viables son coloreadas de azul y son visibles al microscopio; por que las membranas son permeables y permiten que se incorpore el colorante al interior de la célula.
Paracalcular el porcentaje de viabilidad se usa la siguiente fórmula:
% Viabilidad=#celulas vivas# celulas totales (vivas+muertas) *100

En los cultivos celulares es importante el conteo y la viabilidad...