Informe Lab 1 1

U N I V R S I D A D D E C ON C E P C I O N
FACULTAD DE CIENCIAS FORESTALES
INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA VEGETAL












DETERMINACION DE PROTEINAS Y PUNTO ISOELECTRICO






Asignatura: Bioquímica Vegetal
Nombre Alumno: Juan Alveal
Jorge Cid
Fernando Huenchuñir











CONCEPCION – CHILE
2015




Introducción


Dentro de los seres vivos se encuentra un gran número de moléculasdiferentes formadas a partir de elementos como el Oxígeno, Carbono, Nitrógeno e Hidrogeno, donde la gran mayoría ha sido clasificada en cuatro grupos fundamentales: Carbohidratos, Lípidos, Ácidos nucleico y Proteínas.
“Las proteínas son las macromoléculas más versátiles de los seres vivos y desempeñan funciones cruciales en prácticamente todos los procesos biológicos. Funcionan como catalizadores,transportan y almacenan otras moléculas como el oxígeno, proporcionan apoyo mecánico y protección inmunológica, generan movimiento, transmiten impulsos nerviosos y controlan el crecimiento y la diferenciación”. (Berg J, Tymoczko J, Stryer L; 2007)
Dentro de esta clasificación, las proteínas están formadas a partir de aminoácidos (unidad básica de péptidos y proteínas), gracias a la unión de un grannúmero de estos por uniones acido-amino, obteniendo que cada proteína una función diferente

Para la determinación de proteínas se han desarrollado diferentes técnicas basadas en la formación de complejos coloridos entre proteínas y el reactivo especifico. Uno de los métodos más sencillos, económico y rápido, es el de la cuantificación de proteínas con el reactivo de biuret, el cual se basa en la uniónde una solución alcalina de cobre con los enlaces peptídicos de las proteínas. Dando como resultado un complejo de color violeta debido a la reacción entre iones Cu y los pares de electrones no compartidos de N del enlace peptídico.









Objetivos

1.- Cuantificar las proteínas de diversos alimentos (leche descremada, yogurt entero, yogurt light) a través del método de biuret, utilizando unespectrofotómetro y el agua destilada como muestra estandar.
2.- identificar el punto isoeléctrico de una proteína (caseína de leche) a través de soluciones amortiguadoras. Utilizando para la obtención del pH, un pHmetro.

METODOLOGIA Y PROCEDIMIENTO

Materiales:
-Pipetas de 10 ml
-Tubos de ensayo
-Vaso precipitado de 100 ml
-Agua destilada
-Solución de Caseína (contenido 5mg/ml)
-Reactivo deBiuret 50ml
-6 g. aprox) de leche en polvo
-Cubetas para espectrofotómetro
-Papel aluminio
-Espátula
-Varilla de vidrio
-Micro pipeta
-Gradillas
-Plumón permanente
-Solución Ácido Acético 0.1 N
-Solución Acetato de Sodio 0.1




Muestras a ocupar

-Muestra A: Leche descremada.
-Muestra B: Yogurt entero.
-Muestra C: Yogurt light.
-Muestra D: Agua.
Determinación de proteínas por el método de Biuret.Se comenzó rotulando 4 tubos de ensayo de la A a la D con una mezcla de 1ml de muestra y 9ml de agua. Las muestras eran las siguientes: Tubo A: Leche descremada, tubo B: Yogurt entero (Muestra problema), tubo C: Yogurt light (muestra problema); tubo D: Agua (Muestra blanco). Posteriormente se diluyeron los tubos A, B y C 3 veces. De cada tubo ya diluido se extrajeron 3ml de la mezcla y fueronañadidos a 4 tubos de ensayos con las mismas letras (A, B, C y D), y también fueron añadidos 3 ml de reactivo de biuret .Se dejó reposar durante 30 minutos a temperatura ambiente, y se encontró que en los tubos A, B y C hubo un cambio de coloración, lo cual indicó la presencia de proteínas.
Luego las cubetas para espectrofotómetro se rellenaron con las muestras, y la cubeta con la muestra del tubo Dfue utilizada para calibrar el espectrofotómetro.

Espectrofotómetro

El método del espectrofotómetro es muy importante en la cuantificación de proteínas, se basa en la comparación de la absorbancia de una sustancia de concentración desconocida con la de una solución de la misma sustancia cuya concentración se conoce como patrón, la absorbancia del soluto cuya concentración se desea conocer...