Informe Laboratorio Lipasa

ACCIÓN CATALITICA DE LA LIPASA PANCREÁTICA

OBJETIVOS:

1. Determinar la actividad enzimática de la lipasa pancreática al catalizar por hidrólisis una muestra de acilglicéridos.
2.Analizar el efecto activador del ion calcio (Ca2+), sobre la lipasa.

METODOLOGÍA:

Preparación del blanco

En un tubo de ensayo se preparo una solución blanco mezclando:

10 ml de agua
5 gotas deaceite
5 ml de solución enzimática

luego se calentó el tubo de ensayo en agua a ebullición durante un minuto, para luego dejarlo enfriar y trasvasar el contenido a un erlenmeyer, donde se leadiciono tres gotas de fenolftaleína y se titulo con NaOH 0,0186N hasta obtener un color rosado pálido.

Determinación de la actividad enzimática de la lipasa pancreática

Se tomaron seis tubos deensayo y se preparo en cada uno una solución como india la siguiente tabla:

Tubo | Aceite (gotas) | Solución CaCl2 (ml) | H2O(ml) | Fenolftaleína (gotas) |
1 | 5 | - | 10 | 3 |
2 | 5 | - | 10 | 3 |3 | 5 | - | 10 | 3 |
4 | 5 | 0,5 | 9,5 | 3 |
5 | 5 | 0,5 | 9,5 | 3 |
6 | 5 | 0,5 | 9,5 | 3 |

Posteriormente se tomo cada tubo y se titulo con solución NaOH 0,0186N hasta obtener un colorrosa pálido, tal como se hizo con el blanco. Luego, los tubos fueron colocados en un baño maría a 37oC y se le adiciono a cada uno 5 ml de solución enzimática, momento a partir del cual se empezó atomar el tiempo. Transcurridos los primeros 15 minutos se tomaron los tubos 1 y 4 para calentarlos en agua hirviendo durante un minuto con el objetivo de desnaturalizar el enzima lipasa y evitar quesiguiera trabajando. Después de dejarlos enfriar, se trasvaso uno por uno en un erlenmeyer, donde se les adiciono 3 gotas de fenolftaleína para pasar a titular con solución NaOH 0,0186N, anotando encada caso los mililitros de NaOH utilizados.
Transcurridos 25 minutos desde que se empezó a tomar el tiempo, se tomaron los tubos 2 y 5 para llevar a cabo el mismo procedimiento seguido con los...