Informe laboratorio quimica organica cuantificacion de proteinas

INFORME Nº4
“CUANTIFICACION DE PROTEINAS EN SOLUCION”

Nombre :

1.-Objetivos:
-Reconocer proteinas de origen animal ovoalbúmina y BSA.
-Determinar la concentración de una soluciondesconocida por medio de una solucion.
-Conocer y manipular el espectrofotómetro para determinar absorbancias.
-Conocer los principales métodos de valoración de las proteínas.
-Recordar las leyes básicas deabsorción de luz para la determinación cuantitativa de compuestos coloreados.

3. Definir los componentes de un espectrofotómetro que permita comprender el manejo del mismo.
4. Construir una rectade calibración con una solución de albúmina de suero bovino como proteína patrón para cada una de los métodos colorimétricos del Biuret y de Lowry.
5. Establecer el desarrollo de los métodosdeterminando la linealidad, la sensibilidad, el límite de detección y el rango de cada uno de los métodos ensayados.

2.-Fundamento de las Técnicas :
Metodo de Biuret: Reconocen los compuestos que tienendos o mas uniones peptidicas dando color púrpura y se tratan con una solucion alcalina de sulfato de cobre diluido.
La sensibilidad del método es muy baja y sólo se recomienda para la cuantificaciónde proteínas en preparados muy concentrados.

Las características más importantes de la reacción son:
· La reacción del Biuret se aplica, a partir de los tetrapéptidos, a todos los péptidos yproteínas.
· Su rango de determinación es de 1 a 6 mg/ml.
· No depende de la composición de aminoácidos.
· Algunos compuestos (NH4+, Tris, etc.) dan la reacción.

Metodo de Lowry: Para aumentar lasensibilidad de la reacción del biuret, el complejo proteína-Cu2+ se hace reaccionar con el reactivo de Folin-Ciocalteus, dando una coloración azul, con un máximo de absorción a 650 nm. Esta coloración seatribuye a la reducción del ácido fosfomolíbdico/fosfotúngstico a azul de heteropolimolibdeno de composición no definida, por medio de los residuos tirosilos, triptofanilos, y en menor grado,...