Informe Listo

 VICERRECTORÍA ACADÉMICA
INSTITUTO DE CIENCIAS NATURALES



INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
CQU-310




CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS





Integrantes: Aylin González
Macarena Marín
José Mariñanco
Akiles Zárate
Sección: 611
Profesoras: Claudia PinoDaniela Malatesta



INTRODUCCIÓN

La importancia de entender y aplicar el estudio de la Bioquímica y la práctica de esta  es esencial para nuestra carrera de Enfermería ya que nos introduce tanto teórica como experimentalmente a diferentes procesos y niveles moleculares de vital importancia para el óptimo funcionamiento del cuerpo humano.
En este laboratorio veremos los distintosmétodos de cuantificación de proteínas, del cual nos centraremos en el método de Lowry para realizar la parte experimental, en conjunto estudiaremos la Espectroscopía que consta en el intercambio de energía entre la radiación electromagnética y la materia y que a su vez nos ayudara a conocer la concentración de un compuesto en solución, además mediremos la absorbancia mediante una maquina llamadaEspectrofotómetro ,  y por último conoceremos la Ley de Lambert y Beer, que nos ayudarán en una serie de datos y cálculos, para desarrollar así de manera más  eficiente este Laboratorio.
La cuantificación de proteínas es una técnica que determina la concentración de las proteínas en una muestra, si lo llevamos a nuestra área de la salud esto nos permite conocer la actividad específica, para eldiagnóstico de enfermedades, debido a la purificación de dicha proteína en estudio. Hay tres métodos principales que trataremos, uno de ellos es  el método de Biuret, siendo el más bajo en sensibilidad, actuando en los grupos NH de los enlaces peptídicos, formando un complejo coloreado con el Cu+2, en un medio básico, dando un color purpura, le sigue el Método de Bradford el cual se basa en la unión delcolorante Coomassie brilliant blue G-250 con la proteína, lo que provoca un cambio de color como respuesta a diferentes concentraciones de proteínas, uniéndose a la parte azul del colorante, el compuesto interactúa con aminoácidos básicos tales como histidina , lisina y arginina.
Y por el último el Método de Lowry con el cual trabajaremos durante esta práctica; esta técnica es colorimétrica devaloración cuantitativa de las proteínas, en donde a la muestra se le añade un reactivo, el cual, formara un compuesto coloreado con las proteínas, y como dice la Ley de Lambert y Beer a mayor intensidad en color, mayor concentración de proteínas, este método consta de dos partes, la primera es la reacción previa de la proteína en un medio alcalino con iones de Cu+2  que está presente en el reactivode cobre alcalino, éste se une a los átomos de nitrógeno de los enlaces peptídicos formando un complejo de color azul claro, provocando además el desdoblamiento de la estructura tridimensional de la proteína, exponiéndose los residuos fenolitos de tirosina que se encuentran presentes en la mayoría de las proteínas.




OBJETIVOS

Conocer y definir los distintos métodos de cuantificación deproteínas.

Determinar la concentración de la muestra problema, utilizando el método de Lowry.


Determinar absorbancia espectrofotométricamente de cada uno de los tubos.

Aplicar la ley de Lambert & beer





















MATERIALES Y MÉTODOS

Método: El método empleado en el taller fue el método de Lowry.

Materiales:
1 Vaso graduado de 100 ml
7 Tubos de ensayos de 10 ml
1 Pipeta de 5 ml
3Pipetas de 1 ml
2 Propipetas
1 Marcador
1 Gradilla
Piceta de agua bidestilada
1 Cronómetro
7 cubetas
Espectrofotómetro
1 Calculadora

Cantidades a usar:
N° de tubo
Volumen BSA 0,4 mg/ml
Volumen H2O (ml)
Volumen de R.C.A (ml)
Volumen de R.F (ml)
0 Blanco
----------
1,0
1,0
4,0
1
0,1
0,9
1,0
4,0
2
0,2
0,8
1,0
4,0
3
0,3
0,7
1,0
4,0
4
0,4
0,6
1,0
4,0
5
0,5
0,5
1,0
4,0
6 muestra problema
0,5...