Informe MB

 INFORME
MICROBIOLÓGICO

Para comenzar con la identificación de un microorganismo es necesario su obtención en cultivo puro.
Tomaremos una sola colonia del medio de aislamiento y realizaremos su siembra por agotamiento.
Para realizar todos los pasos es imprescindible el uso del mechero cerca.
Los pasos generales a seguir son los siguientes:
1. Coger el asa de platino2. Flamear el asa de platino y también el resto del vástago.
3. Toma de muestra. Partimos de una muestra liquida. Agitamos la muestra, destapamos el tubo sin depositar el tapón en la muestra, flameamos los bordes del tubo, introducimos el asa de platino en el tubo hasta que el extremo quede justo por debajo de la superficie. Esperamos a que deje de burbujear y extraemos el asa. La películaresultante estará cargada de microorganismos. Volvemos a flamear el tubo y finalmente ponemos el tapón.
4. Siembra en el medio de cultivo. Disponemos de cuatro placas. De forma individual haremos el siguiente procedimiento con cada una de ellas: Colocamos sobre la mesa la placa de forma invertida para que se encuentre el medio de cultivo en la parte superior, de esta forma se puede destapar la placacon una sola mano. Una vez destapada, se apoya el extremo del asa cargada con microorganismos sobre la superficie y se efectua la siembra. En nuestro caso haremos la siembra por agotamiento, cuyo objetivo es obtener colonias aisladas del microorganismo sobre el medio de cultivo sólido. Se puede realizar de dos formas, en zig-zag o en estrías, en este caso la haremos de la primera forma. Consiste endesplazar el asa por el medio haciendo un movimiento en forma de zeta desde un borde de la placa hasta el opuesto. Cuando se llega al centro de la placa , se levanta el asa ,se flamea , se enfría en una zona no sembrada y se repite el movimiento, empezando por el otro extremo.
5. Volvemos a flamear el asa.
6. Rotulamos las cuatro placas con algo que nos identifique para saber que son nuestras.7. Los distintos factores ambientales (temperatura, pH, oxígeno, concentración de solutos u osmolaridad, etc.) afectan al crecimiento microbiano. Se debe, por tanto, tener en cuenta las condiciones en que se debe cultivar un determinado tipo de microorganismos.
TEMPERATURA: Distintos tipos de microorganismos crecerán con distintas tasas de crecimiento a una determinada temperatura. Ellopuede ser utilizado como base para el aislamiento de organismos psicrófilos, mesófilos o termófilos. Se incubarán las muestras a 37ºC durante 24 h. y se comparará el crecimiento y tipos de microorganismos obtenidos tras su incubación.
OXÍGENO: Existen métodos para proporcionar una mayor o menor oxigenación en función del tipo de microorganismos que se desee cultiva. Los niveles de difusión deoxígeno en las distintas capas condicionará el crecimiento de distintos tipos de microorganismos (aerobios, anaerobios estribitos, anaerobios facultativos,
microaerófilos). Una de nuestras placas se incubará en anaerobiosis.


Pasadas las 24 h. vemos lo que nos aparece en cada una de las placas. En dos de ellas vemos que no se ha producido crecimiento bacteriano. El crecimiento solo se ha producidoen la que incubamos en anaerobiosis y en otras de las placas de agar-sangre.
Observamos la aparición de masas visibles de células sobre las placas, llamadas colonias. Cada colonia está formada por un único tipo de microorganismo.
El índice de refracción de las bacterias es similar al medio que las rodea y por tanto son difíciles de ver al microscopio. Pero químicamente son muy diferentes, estasdiferencias las podemos observar por medio de tinciones.
Pasos a realizar en una tinción:
1. Extensión. Con el asa de platino colocamos una gota de agua que se deposita en el portaobjetos, después tomamos una colonia y se extiende como antes.
2. Secado. Dejamos la preparación al aire hasta la evaporación.
3. Fijación de los microorganismos al portaobjetos por la llama hasta que se seque,...