Informe Microscopia. Andres Bello

UNIVERSIDAD ANDRES BELLO
FACULTAD DE MEDICINA
LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR
PROFESORES: TATIANA PAZ OPAZO SOTO
CHRISTOPHER SHAWN FITZPATRICK MARIN












TRABAJO PRÁCTICO N°5:
ORGANIZACIÓN SUBCELUAR













AUTORES: DAFNEJARA STEEMBECKER
MARÍA TERESA GODOY LABARCA
ANDREA ARDILES BONGIORNO
MÓNICA DÍAZ HORMAZÁBAL



-30 de mayo de 2011-


INTRODUCCIÓN

“Todos los seres vivos están formados por células, por sus derivados y los productos de su actividad”1. La vida como la conocemos proviene desde un inicioremoto, de una unidad básica llamada célula. Esta unidad es la base de varios otros tipos celulares, pudiendo diferenciarlas a gran escala en Procariotas y Eucariotas. La Eucariota tiene una diferencia importante respecto de la Procariota, y es que posee orgánulos y un núcleo organizado. Entre los organelos presentes en las células eucariotas podemos identificar, entre otros, las mitocondrias, quepermiten la respiración celular y son una importante fuente de energía necesaria para el funcionamiento celular. El núcleo organizado es el organelo que contiene el ADN con toda la información genética necesaria para el desarrollo del ser vivo, que dicta la instrucción de trabajo para todos los orgánulos, que mediante la interconexión de sus funciones permiten la vida, el desarrollo y mantenimientode la célula.


De la necesidad de comprender integralmente el papel de los procesos celulares en la vida, tanto a un nivel estructural como funcional surgen diversos métodos, siendo uno representativo el Fraccionamiento Celular, desarrollada por, entre otros científicos, Albert Claude y Christian de Duve entre 1940 y 1950, esta técnica nos permite, a través de procesos sucesivos decentrifugación, ir separando según tamaño y densidad, porciones enriquecidas con ciertos organelos. Para esto se realiza la homogeneización de la muestra, centrifugación y la sedimentación que nos entrega un sobrenadante que es utilizado para una nueva centrifugación y el pellet o sedimentado que nos entrega la muestra enriquecida en un orgánulo en particular. Las muestras proporcionadas estánmorfológica y bioquímicamente intactas2, para su posterior observación.



OBJETIVOS


- Aprender a utilizar el método de Fraccionamiento Celular y a través de este reconocer la composición de las células según los pellets obtenidos.
- Realizar la Evaluación de los pellets e identificar los organelos mediante el uso de marcadores celulares específicos.
- Realizar los procedimientoscon la rigurosidad que el método requiere para obtener resultados esperados.



MATERIALES Y MÉTODOS

Fraccionamiento Subcelular

a) Fraccionamiento Subcelular de Hígado

Un hígado de ratón adulto previamente tratado, se obtuvo a través de los siguientes procesos: Se extrajo el hígado y se dejo en 50 mL de Buffer IBc frío en un vaso quitándole así la sangre. Luego se pica en pequeñospedazos manteniéndose a baja temperatura en un recipiente con hielo. Se remplaza el IBc por un nueva solución de este de 5 mL frío y fresco, y se transfiere la suspensión a un mortero y se centrifuga a 1600 RPM.
Obtenido el homogeneizado se cambia a un tubo Falcon de propileno y se centrifuga a 2500 RPM, 600 g durante 10 minutos, a una temperatura de 4ºC. De esta forma se obtiene el primersobrenadante.
Se saca el primer sobrenadante y se pone en otro tubo de centrifugación, para ser centrifugado a 6000 RPM durante 30 minutos. El primer precipitado obtenido, que es la Fracción Nuclear, se resuspende en 3 mL de IBc, se agita y se guarda en un pocillo con hielo.
El segundo sobrenadante obtenido después de los 30 minutos, la Fracción Microsomal, se transfiere a otro tubo, y...