INFORME_N5_DE_MICROBIOLOGIA




INTRODUCCIÓN

El principal impedimento en la observación de bacterias en microscopio óptico es la falta de contraste entre la célula en observación y el medio que la rodea, la manera más simple de facilitar el contraste es la utilización de colorantes, revelando la presencia de determinados constituyentescelulares, tales como flagelos, esporas, cápsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc. Para bacterias, el proceso de fijación por calor es lo más habitual, aunque también puede fijarse con sustancias químicas como formaldehido, ácidos y alcoholes. Después de esto se añade el colorante. La fijación produce habitualmente el encogimiento de las células; la tinción, por elcontrario, hace que las células parezcan mayores de lo que son realmente. La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad por los materiales celulares. [1]
Algunos colorantes teñirán mejor sólo después de que la célula haya sido tratada con otra sustancia química, que no es un colorante por sí mismo. Esta sustancia se denomina mordiente; un mordiente habitual es elácido tánico. El mordiente se combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora sí podrá atacar el colorante.
Una técnica de coloración y la más conocida es la tinción de Gram, denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien desarrollo esta técnica en 1844. Sobre la base de la tinción de gran, las bacterias se clasifican en dos grupos: gran positivos y grannegativos.
En cuanto a la tinción de gran la secuencia es la siguiente: el frotis bacteriano se fija con calor se tiñe con cristal violeta por min, se lava con agua, se la aplica un mordiente por 1 min y se lava nuevamente con agua, después se decolora con una mezcla alcohol etílico/acetona. Escurrir y cubrir con safranina (color de contraste) durante 1 min lavar y secar.
Las bacterias Gram positiva yGram negativas tiñen de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared de la célula bacteriana sirve para definir su tamaño y su forma al organismo así como para prevenir la lisis osmótica. La pared de la células Gram positivas es gruesa y consiste en varias capas interconectadas de peptidoglicano (cadenas lineales de un polisacáridoformado por residuos alternativos de N-acetilglucosamina y N-acetilmurámico unidos mediante un enlace) [3] y un poco de ácido teicoico (forman parte de la gruesa capa de peptidoglicano que rodea a la membrana plasmática y están directamente unidos a él mediante un enlace fosfodiéster. De este modo pueden conectar varias capas de peptidoglicano) [3], mientras que las bacterias gram negativas se componende una capa delgada de peptidoglicano y está rodeada por una capa exterior de lipopolisacáridos (forma parte de la pared de la pared celular de las bacterias Gram-negativas. Tienen carácter anfipático, presentan carga negativa, y repelen moléculas hidrofóbicas. Son tóxicos para el hombre, y también se llaman endotoxinas) [3] por lo cual estas dos tipos de bacterias se tiñen de diferente color yes posible identificarlas como Gram positiva o Gram negativa. [2]


MATERIALES Y MÉTODOS

Cultivo de bacterias Gram (+) y Gram (-)
Portaobjetos
Papel absorbente
Puente de coloración
Mecheros
Aceite de inmersión
Cristal violeta
Lugol
Safranina
Alcohol Acetona
Asas
Microscopio
Agua destilada
















Sección A. Extensión: primeramente se limpió un portaobjetos con alcohol yposteriormente se flameó, luego se colocó una gota de agua destilada en el centro del porta y con el asa de siembra, esterilizada a la llama, se colocó una pequeña cantidad de suspensión de bacterias, de una colonia sobre la gota de agua destilada, después con el asa se extendió la gota y las bacterias sobre el porta y se fijó la muestra por el calor, luego se calentó suavemente a la llama del...