Informe Palma
Páginas: 5 (1006 palabras)
Publicado: 12 de marzo de 2013
Laboratorio de Bioquímica
Profesor: OVEIMAR BARBOSA JAIMES
Práctica Extracción e Identificación de Proteínas
Fecha de realización Fecha de entrega: 08/08/2012
Richard Alexander Tovaría García Código: 2060638
RESUMEN
El desarrollo de esta práctica se hizo con el objeto deestudiar el comportamiento del ADN, frente a cambios de pH y cambios de temperatura, se inicio con la extracción de ADN de una muestra de levadura. Después de extraído el ADN de la levadura se preparo una dilución que entrará en el rango de análisis del espectrofotómetro.
INTRODUCCIÓN
Una de las características de los seres vivientes es su reproducción; con este fin, todos ellos utilizan los ácidosnucleícos para almacenar y transmitir la información genética. Las biomoléculas en las que se almacena la información genética en forma codificada es el ácido desoxirribonucleico (ADN).
El análisis de la molécula de ADN constituye una herramienta muy valiosa que ha permitido 25 delinear estrategias aplicadas a la investigación básica y al diagnóstico de innumerable entidades de origengenético, basado esto en el principio de que la molécula de ADN es única en cada individuo y contiene toda la 30 información necesaria para el desarrollo y función de los organismos. El ADN puede ser extraído de muchos tipos de materiales biológicos (tejidos, líquido amniótico, sangre) y el éxito del análisis.
Molecular depende de su adecuado aislamiento en términos de cantidad, calidad y pureza; esnecesario separar el ADN del resto de los componentes celulares así como del material no biológico que pueda estar presente. Los 40 protocolos de extracción buscan, en general eliminar o diluir potentes inhibidores de reacciones de amplificación que eviten o dificulten el análisis posterior. Idealmente los procesos de aislamiento deben ser rápidos y 45 fáciles de realizar, garantizando la obtencióndel material genético aun con pequeñas cantidades de fluidos o tejidos.
El proceso general de aislamiento involucra tres 50 pasos: primero, la lisis de las membranas celulares, mediante el uso de buffer específicos y altas temperaturas; segundo, la degradación de las proteínas por incubación con proteinasa K y/o sales saturadas; tercero, la extracción del
MARCO TEÓRICO
PROCEDIMIENTOEXPERIMENTAL
2.1. Extracción de ADN
Se tomaron 5g de levadura para pan marca Levapan del tipo Sachoromises Cerevisae y 10g de arena lavada en un mortero moliéndose vigorosamente.
El ADN macerado se llevó a un Erlenmeyer con tapa y se agregó 30 mL de solución salina con EDTA, se agitó fuertemente, se agregó 2 mL de SD y se llevó rápidamente a un baño de María a 60 ºC durante 10 minutos.Se enfrió a temperatura ambiente, se agregó 5mL de perclorato de sodio sobresaturado (6M), se mezcló, se agregó 40mL de cloroformo-alcohol isoamílico y se agitó por 15 minutos. Se llevó a la centrífuga a 5000 rpm 40 por 10 minutos.
Se retiró la capa acuosa superior con una pipeta pasteur. Se colocó en un Erlenmeyer y se agregó lentamente 70mL de etanol, 45 agitando con una varilla de vidrio. Secentrifugó por 2 minutos.
El ADN se separó del líquido y se mezcló con 3mL con agua y 0,2mL de buffer salino EDTA.
50
Se realizó una dilución de 1/100 de ADN en solución de 0.15% NaCl. Se midió la absorbancia a 260nm y 280nm.
Efecto del pH
Posteriormente, se realizó el estudio el efecto del pH sobre el ADN, preparando soluciones de la misma concentración y llevándolas a diferentes pH8.5, 9.5, 10.5, 11.5 y 12.5
Efecto de la temperatura
También se analizó el efecto de la temperatura sobre el ADN, preparando 5 soluciones de la misma concentración y llevándolas a diferentes temperaturas (60, 70, 75, 80, 85 y 65 90ºC) y se midió la absorbancia.
CÁLCULOS Y RESULTADOS
La variación de de la Absorbancia del ADN con el cambio de pH se consigno en la siguiente tabla:...
Profesor: OVEIMAR BARBOSA JAIMES
Práctica Extracción e Identificación de Proteínas
Fecha de realización Fecha de entrega: 08/08/2012
Richard Alexander Tovaría García Código: 2060638
RESUMEN
El desarrollo de esta práctica se hizo con el objeto deestudiar el comportamiento del ADN, frente a cambios de pH y cambios de temperatura, se inicio con la extracción de ADN de una muestra de levadura. Después de extraído el ADN de la levadura se preparo una dilución que entrará en el rango de análisis del espectrofotómetro.
INTRODUCCIÓN
Una de las características de los seres vivientes es su reproducción; con este fin, todos ellos utilizan los ácidosnucleícos para almacenar y transmitir la información genética. Las biomoléculas en las que se almacena la información genética en forma codificada es el ácido desoxirribonucleico (ADN).
El análisis de la molécula de ADN constituye una herramienta muy valiosa que ha permitido 25 delinear estrategias aplicadas a la investigación básica y al diagnóstico de innumerable entidades de origengenético, basado esto en el principio de que la molécula de ADN es única en cada individuo y contiene toda la 30 información necesaria para el desarrollo y función de los organismos. El ADN puede ser extraído de muchos tipos de materiales biológicos (tejidos, líquido amniótico, sangre) y el éxito del análisis.
Molecular depende de su adecuado aislamiento en términos de cantidad, calidad y pureza; esnecesario separar el ADN del resto de los componentes celulares así como del material no biológico que pueda estar presente. Los 40 protocolos de extracción buscan, en general eliminar o diluir potentes inhibidores de reacciones de amplificación que eviten o dificulten el análisis posterior. Idealmente los procesos de aislamiento deben ser rápidos y 45 fáciles de realizar, garantizando la obtencióndel material genético aun con pequeñas cantidades de fluidos o tejidos.
El proceso general de aislamiento involucra tres 50 pasos: primero, la lisis de las membranas celulares, mediante el uso de buffer específicos y altas temperaturas; segundo, la degradación de las proteínas por incubación con proteinasa K y/o sales saturadas; tercero, la extracción del
MARCO TEÓRICO
PROCEDIMIENTOEXPERIMENTAL
2.1. Extracción de ADN
Se tomaron 5g de levadura para pan marca Levapan del tipo Sachoromises Cerevisae y 10g de arena lavada en un mortero moliéndose vigorosamente.
El ADN macerado se llevó a un Erlenmeyer con tapa y se agregó 30 mL de solución salina con EDTA, se agitó fuertemente, se agregó 2 mL de SD y se llevó rápidamente a un baño de María a 60 ºC durante 10 minutos.Se enfrió a temperatura ambiente, se agregó 5mL de perclorato de sodio sobresaturado (6M), se mezcló, se agregó 40mL de cloroformo-alcohol isoamílico y se agitó por 15 minutos. Se llevó a la centrífuga a 5000 rpm 40 por 10 minutos.
Se retiró la capa acuosa superior con una pipeta pasteur. Se colocó en un Erlenmeyer y se agregó lentamente 70mL de etanol, 45 agitando con una varilla de vidrio. Secentrifugó por 2 minutos.
El ADN se separó del líquido y se mezcló con 3mL con agua y 0,2mL de buffer salino EDTA.
50
Se realizó una dilución de 1/100 de ADN en solución de 0.15% NaCl. Se midió la absorbancia a 260nm y 280nm.
Efecto del pH
Posteriormente, se realizó el estudio el efecto del pH sobre el ADN, preparando soluciones de la misma concentración y llevándolas a diferentes pH8.5, 9.5, 10.5, 11.5 y 12.5
Efecto de la temperatura
También se analizó el efecto de la temperatura sobre el ADN, preparando 5 soluciones de la misma concentración y llevándolas a diferentes temperaturas (60, 70, 75, 80, 85 y 65 90ºC) y se midió la absorbancia.
CÁLCULOS Y RESULTADOS
La variación de de la Absorbancia del ADN con el cambio de pH se consigno en la siguiente tabla:...
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