Informe transformacion E.coli

Universidad de Puerto Rico
Recinto Universitario de Mayagüez
Departamento de Biología
Laboratorio de Genética Biol 3300L

Expresión de los plásmidos PGLO y PUC19 en la transformación de
genes de Echerichia coli
Noeliamar Meléndez, Ángela I. Santiago, Gian C. Wiscovich
Laboratorio de Genética (Biol 3300L-072L), Departamento de Biología, Universidad de
Puerto Rico, Mayagüez, Puerto Rico

ResumenEn este experimento, transformamos el genoma bacteriano de Escherichia coli, con
los plásmidos pGLO y pUC19. Se les insertaron los plásmidos mediante una
impermeabilización de la membrana y se cultivaron en medios de Luria-Bertani y ampicilina,
a las bacterias con pGLO se les añadió arabinosa al medio y a las bacterias pUC19 se les
añadió X-gal. Estos plásmidos contienen la información genéticapara que el primero haga a
la bacteria fluorescente cuando se encuentre en arabinosa y el segundo le permite hidrolizar
al medio de lactosa y consecuentemente teñirla de azul; ambos plásmidos otorgan resistencia
a la ampicilina. Según los resultados, la expresión de genes del primer plásmido aparentó ser
incompleta, pues suponía exhibir la bacteria una florescencia la cual no vimos pero demostró
serresistente al antibiótico. Para el segundo plásmido hubo asimilación entera y aparente de
parte de las bacterias pero solo en unas pocas colonias de color, a la vez que resultaron ser
resistentes al antibiótico.

Introducción
En este experimento observamos los efectos de dos plásmidos sobre el ADN de
Escherichia coli (E. coli). Los plásmidos introducidos en el genoma de la bacteria fueron
pGLO ypUC19, cuyos efectos en su fisiología se estudiarán en este informe utilizando como
base teórica la síntesis de proteínas y el rol de los operones, inducibles y represibles, en la
regulación de expresión de los genes de la bacteria. Al introducir los plásmidos pGLO y
pUC19 logramos expresar esta información genética mediante la manipulación del medio de
cultivo favoreciendo las proteínas que setraducen de dichos plásmidos.
La síntesis de proteínas consta de copias del material genético ADN transcritas a
hebras de ARN para luego, este patrón de nucleótidos, traducirse a una cadena de
aminoácidos o proteínas. En la transcripción, la enzima ARN-polimerasa, ‘lee’ una hebra de
ADN en dirección de 5’ a 3’, y sintetiza una hebra de ARN que es complementaria en sus
bases nitrogenadas a la hebrade ADN en cuestión. La síntesis de esta hebra de ARN es a
partir de la utilización de nucleótidos libres que se encuentran en la célula. En las células
eucariotas, este proceso es más complejo pero no se discutirá pues las células bajo estudio
son procariotas. La hebra de ARN sintetizada, que se conoce como ARN mensajero (o
ARNm), será luego traducida a aminoácidos por un ribosoma.
En este ribosomase lleva a cabo el proceso de traducción y empezará por donde el
ARNm codifique para el aminoácido metionina, en este codón se colocará el ribosoma y un
ARN de transferencia (o ARNt) se situará con el aminoácido correspondiente y se unirá al
ARNm mediante un anticodón. Para sintetizar el aminoácido próximo, se sitúa un segundo
ARNt con otro aminoácido para el cual codifique ese codón del ARNm.Cuando los dos
aminoácidos estén en el ribosoma, éstos serán unidos mediante enlace peptídico por la
enzima Aminoacil-ARNt-sintetasa, luego de esto el ribosoma se mueve al siguiente codón
del ARNm y se repetirá el proceso de acuerdo a la secuencia de codones del ARNm y los
aminoácidos que codifique. Según se forman estos enlaces, se va expulsando del ribosoma
un polipéptido en sentido contrario a ladirección del ribosoma hasta llegar a uno de los tres
codones que codifica para la terminación de la síntesis de la cadena de aminoácidos. Este
proceso resultará en las proteínas que participarán en la expresión del material genético
original del organismo. Es este proceso el cual manipulamos para que la bacteria codificara
proteínas según los genes impuestos por el plásmido.
En el ADN, hay un...