Informe n°1-Bioquímica



UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)


FACULTAD DE MEDICINA

BIOQUÍMICA
PRÁCTICA N°1
FOTOCOLORIMETRÍA


2012

I INTRODUCCIÓN
Los espectrocolorímetros son instrumentos de medición que se emplean para efectuar mediciones de luz transmitida o absorbida por materiales sólidos o líquidos, los cuales son ampliamente utilizados endiversas determinaciones analíticas en la salud, universidades, institutos de investigaciones, centros del Polo Científico, centros de la industria alimenticia entre otros.

La Espectrocolorimetría se basa en el principio de medición de la energía radiante absorbida por las sustancias en la región visible del espectro electromagnético. La absorción de energía radiante en la región visible delespectro produce excitación en el sistema de electrones de las moléculas de una sustancia.

Cuando la energía radiante incide sobre un cuerpo transparente, una parte de la misma se refleja, otra parte se absorbe y otra parte se transmite. En el caso de los cuerpos opacos ninguna parte se transmite. Los procesos respectivos se denominan reflexión, absorción y transmisión, las magnitudes de los mismosse miden en función de la reflectancia, absorbancia y transmitancia.

El método de medición de los espectrocolorímetros está basado en la medición del poder radiante en función de la longitud de onda, o sea, en la capacidad del material sólido o de los iones o moléculas en solución para absorber luz monocromática dentro del intervalo (de 350 a 800) nm.

El principio de medición de losespectrocolorímetros se basa en la proporcionalidad existente, a través de la Ley de Bouger Lambert Beer, entre la concentración del compuesto químico formado por la adición de un reactivo y la energía radiante absorbida por el mismo (se utiliza un intervalo de concentración para lo cual la proporcionalidad es lineal), dicha relación nos permite calcular la absorbancia, la transmitancia y laconcentración de una sustancia en estudio, lo que explica el amplio uso de la Espectrocolorimetría en un sin número de determinaciones analíticas de todo tipo.

Estos instrumentos de medición están formados por las siguientes partes:


• Fuente de energía radiante
• Selector de longitud
• Cámara de cubetas
• Unidad de medición
• Sistema óptico
• Sistema de medición
II MATERIALES
1. Gradillas ytubos de ensayo
2. Pipetas de vidrio
3. Espectrofotómetro
4. Solución patrón de CuSO4.5H20 4g/dL
5. Agua destilada

III OBJETIVOS
Comprobar la utilidad del método fotocolorimétrico para realizar análisis cuantitativos.
Comprobar la ley de Lambert-Beer.
Determinar y realizar la curva de calibración y el factor de calibración.

IV PROCEDIMIENTO
IV.1 Preparación de las solucionesestándares

En la primera fase de la práctica preparamos las soluciones estándares, con la solución patrón de CuSO4 4g/dL (PM=249.5g/mol) y agua destilada, en cinco tubos de ensayo, según el protocolo de la guía de práctica:

TUBO
1
2
3
4
5
Solución patrón (mL)
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
Agua destilada (mL)
4.5
4.0
3.5
3.0
2.5

Calculamos las concentraciones de cada solución estándar,en g/dL y mo/L, según el principio de conservación de moles en diluciones: CI x VI = CF x VF

P.e: Tubo1: 4g/dLx0.5mL=CFx5mL CF=0.4g/dLx(10/PM)=0.4g/dLx(10/249.5g/mol)=0.016mol/L

TUBO
1
2
3
4
5
Concentraciones (g/dL)
0.4
0.8
1.2
1.6
2.0
Concentraciones (mol/L)
0.016
0.032
0.048
0.064
0.080
Luego, mezclamos y homogenizamos las soluciones de cada tubo y los llevamos a leer,al espectrofotómetro, a una longitud de onda de 760 nm (filtro rojo):

IV.2 Preparación de las muestras problema

En la segunda fase de la práctica disponíamos de dos muestras cuyas concentraciones eran desconocidas y debíamos hallarlas según lo indicaba el protocolo de la guía de práctica.

Preparamos las dos muestras problema, la primera de ellas se la denominó MUESTRA PROBLEMA A (MPA),...