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PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO, SIEMBRA, IDENTIFICACIÓN MORFOLÓGICA Y CUANTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS
José David Ortiz Salazar, estudiante ingeniería química, jdortizs@unal.edu.co

Sergio Andrés Mesa Grajales, estudiante ingeniería química, samesag@unal.edu.co

RESUMEN
En la presente práctica se desarrolló el componente experimental del estudio de microorganismos. Se prepararon los mediosde cultivo que permitan satisfacer las necesidades nutricionales para el crecimiento de la levadura S.cerevisiae, para ello se dispuso de medio liquido en Erlenmeyer y medio solido en caja de Petri; pasados dos días se realizaron observaciones en microscopio óptico, llevando a cabo la tinción de Gram, y cuantificación de biomasa, empleando espectrofotómetro de luz visible, para determinar elprogreso en el crecimiento celular que presentó la especie empleada.

Palabras clave: microorganismo, medio de cultivo, caja de Petri, tinción de Gram, espectrofotometría



INTRODUCCIÓN

El estudio de los microorganismos, como forma, procesos metabólicos, componentes químicos que los constituyen o producen, permite identificar los límites y las potencialidades de microorganismos de interés para suempleo en procesos biotecnológicos. El aislamiento y cultivo de la especie de interés en el laboratorio involucra la preparación de un medio de cultivo, que corresponde a solución líquida o liquida que contiene los nutrientes necesarios para el crecimiento del microorganismo, después de cultivar(inocular) el microorganismo se deja en condiciones adecuadas de temperatura, iluminación y humedad paraque éste desarrolle los procesos vitales; pasado este periodo de tiempo se realizan estudios que permitan determinar el tamaño, forma, estructura de las células, entre otras características, para ello se emplean técnicas como microscopia y espectrofotometría. Para la observación en microscopio se lleva a cabo la tinción de Gram, en la cual se emplean colorantes que interactúan con estructurascelulares, facilitando la observación y constituyendo una primera clasificación morfológica. Para determinar el crecimiento microbiano se emplean medidas de turbidez; partiendo de relación existente entre la desviación de luz incidente y cantidad de células presentes en la muestra se construyen curvas estándar, las cuales relacionan medidas de absorbancia en espectrofotómetro con cantidad de biomasa(1).

la levadura Saccharomyces cerevisiae es un microorganismo perteneciente al reino fungí y corresponde a una levadura  facultativa, es decir, crece en condiciones aerobias y anaerobias. Su temperatura óptima de crecimiento se encuentra entre 22 y 30°C, y pH entre 3.8 a 5.61. La S. cerevisiae es de gran importancia en la industria alimenticia pues a partir de esta se lleva a cabo la fermentaciónalcohólica, proceso fundamental en la elaboración de cervezas y vino.



OBJETIVOS

Objetivo General:
Afianzar el aprendizaje teórico de la caracterización de microorganismos desde la práctica.

Objetivos Específicos:
● Entender la preparación de medios de cultivo.
● Realizar siembras de microorganismos.
● Cuantificar biomasa por análisis espectrofotométrico y peso seco (teórico).
● Identificardiferencias morfológicas, entre colonias de bacterias Gram positivas y negativas después de ser sometidas a tinción.

METODOLOGÍA


Preparación de medios de cultivo:

Se estiman las cantidades necesarias de nutrientes requeridos por la levadura S.cerevisiae para llevar a cabo los procesos vitales.

Sustancia
Medio solido(g)
Medio liquido(g)
D-glucosa
0.150
0.5
Extracto de levadura
0.045
0.15Extracto de malta
0.045
0.15
peptona
0.075
0.25

Con el fin de preparar el medio sólido se debe añadir 0.30 gramos de agar-agar y aforar a un volumen total de 15 ml; para la preparación del medio líquido, después de añadir las cantidades necesarias de nutrientes, se afora a 45 ml.En este medio de cultivo la d-glucosa sirve como fuente de carbono y energía para la síntesis de masa celular; el extracto...