ING. Agronomo

Introducción.
Entre la identificación de organismos patógenos en plantas existen diferente métodos desde los convencionales hasta los avanzados, tales como los métodos moleculares (MM), específicamente en el área de bacteriología se procede con las siguientes técnicas: serología, detenciones de proteínas y de ácidos nucleicos entre otros. Para los fines de este trabajo veremos la importanciaque radica en los análisis moleculares a muestras previamente procesadas con las medidas rigurosa que amerita la entrada de material vegetal a las áreas del laboratorio, para este caso sería de bacteriología molecular.
Los MM son un conjunto de elementos dentro de los cuales aplicados con técnicas avanzadas permiten realizar un estudio puntual para la identificación de alguna patología, de estamanera se pretende diagnosticar de una forma más que convencional pues se está trabajando directamente con el análisis del ADN, del material genético procedente de la muestra vegetal procesada, además permite estar al tanto de las características hereditarias de los materiales conociendo el comportamiento genético de este.
En la actualidad se ha utilizado los MM en trabajos de investigación paradiagnosticar organismos fitopatogenos que probablemente estén afectando la planta, Muchas bacterias patógenas crecen pobremente en medios sólidos y otras solo lo hacen en medios líquidos, tornándose difícil su identificación por los métodos clásicos. Sin embargo los métodos moleculares permiten sobreponerse a  estas limitaciones.

Por otra parte, algunas especies bacterianas no pueden,con los métodos tradicionales, diferenciarse de especies muy cercanas. Para estas especies los métodos moleculares resultan los más convenientes. Sin embargo aún bacterias que desarrollan difícilmente en cultivos de laboratorio pueden ser identificadas por los laboratorios que utilizan tecnologías de amplificación génica.
Trabajo realizado en la identificación de bacterias en humano:
Se utilizóla técnica de PCR ya que amplifica una secuencia de ADN con la enzima polimerasa; es muy sensible y específica. En donde el Objetivo fue Estandarizar una técnica de PCR para identificar Bartonella bacilliformis en sangre total de pacientes con bartonelosis aguda. Material y métodos: Se usó muestras de sangre total de seis pacientes con diagnóstico clínico y microbiológico de bartonelosis aguda.Se extrajo el ADN de sangre total usando el detergente guanidina DNAzol® BD. Se amplificó el ADN usando los cebadores de extensión "primers" 16S y 23S del espaciador de trascripción interna (ITS). Se hizo electroforesis de los productos de amplificación en gel de agarosa. Se compararon los pesos moleculares de las bandas observadas en la electroforesis con un marcador de 100 pares de bases.Resultados: Se determinó que la concentración de ADN extraído por DNAzol® BD corresponde alrededor de 6 ng de ADN. El producto amplificado de muestras de sangre total fue alrededor de 1000 pares de bases, idéntico al extraído de los hemocultivos de B. bacilliformis y claramente diferente del de otras especies. Las diluciones de las extracciones mejor detectadas por PCR fueron 1/5 y 1/10. Conclusiones:El ADN de B. bacilliformis extraído con DNAzol® BD de sangre total de pacientes con bartonelosis aguda es amplificado por PCR utilizando los primers 16S y 23S; es posible usar esta técnica para el diagnóstico etiológico rápido.
Bartonella bacilliformis es una bacteria aeróbica Gram negativa, pleomórfica, móvil, que mide 2-3 µm de largo y 0.2 - 0.5 µm de ancho. Penetra y parasita glóbulos rojos,teniendo forma bacilar, cocoide o cocobacilar. Dichas formas se colorean con tinción Wright, Giemsa y Leishman.
Investigaciones realizadas en plantas

La reacción de cadena de Polimerasa
Glosario

16S ARNr: es un Acido Ribo-Nucléico asociado con la subunidad pequeña de de los ribosomas de los procariotas.
Adenina, Citosina, Guanina, Timina: Bases nitrogenadas que conforman el ADN. A...